人脂肪间充质干细胞治疗大鼠急性心肌梗死的实验研究

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背景:目前急性心肌梗死治疗手段在一定程度上可以挽救濒死的心肌细胞,但不能使坏死的心肌得到有效的修复。干细胞移植治疗心肌梗死等心血管疾病展现了它的独到之处。尤其是脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymalstem cells,ADMSCs)以其来源丰富、取材方便、自体移植无免疫排斥、体外增殖能力强等优势成为理想的种子细胞。但是ADMSCs移植治疗心肌梗死的研究甚少,探寻ADMSCs移植治疗大鼠心肌梗死机制,具有重要意义。研究目的:(1)体外分离及无分化扩增培养HADMSCs。(2)观察异种异体移植HADMSCs在急性心肌梗死大鼠存活并分化为心肌样细胞的情况。(3)探讨移植HADMSC对大鼠心肌梗死心功能改善情况及可能机制。方法:(1)获取健康青年人腹部的脂肪组织,采用胶原酶消化法及贴壁法分离HADMSCs,并对其传代培养,选择第3代HADMSCs,运用流式细胞仪对其表面标志分子进行鉴定。并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxyUridine,Brdu)对第3代ADMSCs标记并观察标记情况。(2)雄性SD大鼠30只,体重180~210g,随机分成假手术组10只、心梗对照组10只和心梗移植组10只。结扎大鼠前降支,建立急性心肌梗死模型,记录心电图检测梗死模型建立是否成功。一周后将Brdu标记的第三代HADMSCs通过二次开胸心外膜注射至心梗移植组,心梗对照组及假手术组注射等量磷酸盐缓冲液。(3)建模前、建模后一周(移植前)及建模后五周(移植后)分别对各组行超声心动图检查,观察各组心功能情况。建模后五周处死所有实验动物,取心肌梗死区组织制作石蜡切片并行HE染色观察心肌梗死情况,另取心脏组织做TTC染色并用ImageTool3.0病理图像分析系统计算左室梗死面积百分比,用免疫组化染色法检测移植后的HADMSCs存活和分布情况及心肌特异性蛋白的表达。实验结果:(1)成功分离培养出HADMSCs,体外培养10代未见分化,流式细胞仪检测细胞表面标记物CD29和CD44表达为阳性,CD45和CD117表达为阴性。(2)超声心动图检查结果显示:建模后一周(移植前),心梗对照组和心梗移植组与假手术组比较,左心室收缩末期直径、舒张末期直径及射血分数均有统计学差异(P<0.05),但心梗对照组和心梗移植组两组上述心功能各指标均无统计学差异(P>0.05);建模后五周(移植后),心梗移植组上述心功能各指标均优于心梗对照组(P<0.05),且心梗移植组移植前后心室收缩末期直径、舒张末期直径,射血分数均有统计学差异(P<0.05),而心梗对照组移植前后心室收缩末期直径、舒张末期直径,射血分数均无统计学差异(P>0.05)。(3)心肌组织HE染色结果显示心梗移植组与心梗对照组均可见梗死的心肌,TTC染色计算梗死面积结果显示心梗移植组左室梗死面积百分比[(23.6±4.3)%]小于心梗对照组左室梗死面积百分比[(32.4±5.6)%](P<0.05)。(4)心梗移植组心肌组织免疫组化结果显示带有Brdu标记的移植细胞在心梗周边区域存活,且特异性肌钙蛋白呈阳性表达。结论:(1)体外成功的分离培养HADMSCs,并能无分化扩增。(2)异种异体移植的HADMSCs能够在梗死心肌内存活并分化为心肌样细胞,减小梗死面积,改善心肌梗死后心功能,抑制心室重构。
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