Ⅴ型磷酸二酯酶（PDE5）能特异性水解cGMP，使其浓度降低，男性勃起功能障碍（ED）与cGMP的水平下降有着密切关系，因此，可以通过抑制PDE5酶活性使cGMP水平升高，从而达到治疗ED的目的。ED严重影响男性的身心健康。所以，研究和开发特异性的PDE5抑制剂尤为重要。本项目对PDE5及其新合成的化合物CYⅠ、CYⅡ、CYⅢ、CYⅣ、CYⅤ和CYⅥ进行了如下研究： 1.人血小板分离及其PDE5的提取、纯化 新鲜的机采血小板（来自健康捐献者）加入冰冷Hepes缓冲液悬浮，利用超声波粉碎机破碎血小板，离心，上清液采用Pharmacia FPLC系统Acta Primer以及Pharmacia Mono Q阴离子交换柱HR5/5分离纯化PDEs，得到分步收集液。 2.PDE活性测定 分析PDE的活性时，分步收集液（2～5 uL），3H-cGMP（2 mCi/mL），MgCl2（5 mmol/L）溶于Tris-HC1缓冲液中。加入3H-cGMP启动PDE5，水解反应，水浴箱中孵化，沸水浴终止反应。然后每管加入蛇毒（1mg/ml），30℃保温，再加入Bio-Rad AGl-X2阴离子交换树脂，间断混匀，放置30min后瞬时离心取0.5ml，加入5ml闪烁液，用sigma LS1801液闪仪测定各管终产物的cpm值。通过比较分步收集液水解3H-cGMP活性，表明PDE5集中在第5管和第6管。进一步确定其最适反应条件为：最适反应时间为15min，最适酶量为2ul（PDE5原液）和最适底物浓度为0.2pmol/ul。PDE5酶的活性单位为8.89×10-5nkat。 3.Ⅴ型磷酸二酯酶抑制剂的筛选 以最佳反应条件用于分析CYⅠ、CYⅡ、CYⅢ、CYⅣ、CYⅤ和CYⅥ对PDE5的抑制效应动力学，六种新合成的化合物的浓度均分别为10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L10-10mol/L和10-11mol/L。用sigma LS1801液闪仪分别检测加入样品及未加样品时的cpm值，通过计算它们对PDE5的抑制率（以SDL为对照），利用依格线性回归Ver2.5软件对PDE5抑制效应进行回归分析，求得CYⅠ、CYⅡ、CYⅤ、CYⅥ和SDL的IC50值分别为0.0200mmol/L、0.0032mmol/L、0.0027 mmol/L、0.0044 mmol/L和0.0031 mmol/L. CYⅢ和CYⅣ的浓度为10-6 mol/L时，对纯化得到的PDE5活性几乎无抑制作用。结果表明，CYⅤ对PDE5的抑制作用程度强于SDL的；而CYⅡ和SDL对PDE5的相似；CYⅥ相比之下，则较弱；CYⅠ的作用最弱。由此初步断定，在这六种新合成的化合物中，CYⅤ对PDE5具有很好的抑制作用，为后续工作奠定基础。有望成为对ED治疗有效的药物。