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柞蚕是完全变态的绢丝类昆虫，生长至五龄后期合成并分泌一种丝素蛋白，约占蚕丝的80％。柞蚕丝素蛋白在结构上与家蚕不同，家蚕丝素蛋白是山两条多肽链通过二硫键连接而成，而柞蚕丝素蛋白是由一条多肽链构成的。因此，我们根据柞蚕丝素蛋白这一特点，构建了柞蚕丝素基因转移表达载体，并采用精子介导法进行转基因的研究。目前，国内外还未见有关这方面的研究报道。 本文运用PCR、RLM-RACE等方法，克隆并分析了柞蚕丝素蛋白基因，构建了柞蚕丝素基因转移表达载体，利用同源重组的原理通过精子介导法对柞蚕丝素蛋白基因进行基因打靶，探讨了柞蚕转基因的可能性。主要研究内容和结果如下： 利用PCR方法从柞蚕基因组中分离出丝素基因5’端与3’端部分片段。其中5’端片段长度为1330bp，它的5’端上游由CAAT box、TATA盒、prim transcript所组成。将其与家蚕、天蚕的相应序列进行比较发现，柞蚕与天蚕的同源率要远远高于家蚕的相应序列。用RLM-RACE方法确定了柞蚕丝素基因转录起始位点的第一个碱基位于ATG上游-27碱基处。从序列中可以看出：若转录起始点第一个核苷酸标为+1，则TATA盒位于-25处；CAAT盒位于-70处，符合真核生物的启动子特征。通过对启动子区域的删除分析，确定了该启动子的核心区域在ATG上游约260bp范围内。 克隆的丝素基因3’端片段为1400bp，它包括13个多聚丙氨酸结构域和由100bp组成的3’端非编码序列(UTR)。它与另外一条已知的序列同源性非常高，其同源率为90％，在比较中还发现它缺失了一个重复序列，在获得的序列中共有5个Chi样与重组热点有关的序列。 以克隆的柞蚕丝素基因5’和3’端片段作为同源重组序列，组建成柞蚕丝素基因转移表达载体pFG-1和pFG-2，将绿色荧光蛋白基因插入到该载体的相应位点。通过对五种昆虫细胞进行转染试验表明，在其中的樗蚕细胞(Sc)、草地贪夜摘要蛾细胞(S份)、HighFive细胞系中绿色荧光蛋白得到表达，由此可以证明该载体的构建是正确的。而在果蝇细胞系(S2)、Gv一1细胞系中没有发现有绿色荧光的细胞，说明该载体具有种属特异性。 将构建的柞蚕丝素基因转移载体，采用精子介导的方法进行了转基因柞蚕研究。通过PCR检测发现有n.09%的蛾区表现为阳性，在其五龄幼虫期检测的阳性率为3.27%。将PCR检测阳性的幼虫经过进一步的Southern blot、Northern blot和Western blot检测，结果发现，在部分幼虫中绿色荧光蛋白基因(GFI，)己经整合到柞蚕染色体上并在丝腺内得到表达。