EYA2基因的CpG岛甲基化对肺腺癌发生发展的影响

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本论文旨在研究EYA2基因在肺腺癌中的甲基化水平和该基因表达量在肺腺癌细胞生长中的作用。首先,通过Western blotting方法检测了各种非小细胞肺癌细胞中EYA2蛋白的表达量,并使用荧光定量PCR方法检测EYA2基因的mRNA转录水平,结果显示蛋白水平和]mRNA转录水平在肺腺癌细胞中明显上调。其次,采用亚硫酸盐修饰测序法检测EYA2基因全CpG岛的甲基化水平,发现EYA2基因在肺腺癌细胞和肺腺癌组织中处于低甲基化水平,而在对照正常肺部细胞中处于高甲基化水平,且EYA2基因的甲基化程度和其蛋白表达量呈反向趋势。第三,利用RNA干扰方法在肺腺癌细胞中将其蛋白表达量稳定下调,检测EYA2基因表达水平对一些肺腺癌细胞生长相关指标的影响,具体方法如下:1.采用MTS法检测EYA2基因表达下调处理细胞的增殖情况;2.染色处理后,在流式细胞仪上检测该蛋白下调处理细胞的周期变化和凋亡变化;3.使用划痕模拟伤口愈合模型和trans-well模型的方法分别检测这些经过下调处理细胞的迁移和侵袭能力变化。结果发现EYA2基因表达下调导致肺腺癌细胞增殖速率明显低降低,处于G0/G1期的细胞数量明显上升,S期和G2/M期的细胞数量下降,细胞凋亡数量明显变多,细胞迁移和侵袭能力的明显减弱。由此得出,EYA2基因甲基化水平的降低以及其表达量升高在一定程度上对肺腺癌的发生与生长起着重要作用。
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