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目的:急性肾损伤(Acute Kidney Injury,AKI)发病重危害大,但是治疗手段有限。本研究通过腹腔注射顺铂建立小鼠急性肾损伤模型,观察槲皮素(Quercetin)治疗后对肾脏功能的改善以及对炎症的抑制作用,本课题旨在研究槲皮素对AKI肾脏中巨噬细胞炎症的抑制作用及潜在机制,为急性肾损伤的防治提供科学依据。方法:本研究在体内建立顺铂诱导的AKI小鼠模型,在体外建立LPS诱导的BMDM(骨髓来源巨噬细胞)炎症模型,通过加入不同剂量的槲皮素观察槲皮素对AKI肾脏损伤和炎症的抑制作用,以及对巨噬细胞炎症的下调机制。总计60只SPF级C57BL/6小鼠分为6组,购回后适应性喂养一周后分组,每组10只小鼠。分组为:生理盐水对照组,顺铂诱导AKI组,顺铂诱导AKI+槲皮素50mg/kg/天组,顺铂诱导AKI+槲皮素100mg/kg/天组,槲皮素100mg/kg/天组,DMSO溶剂对照组。槲皮素在顺铂腹腔注射(20mg/kg)前一小时通过灌胃给药,且每天给药,直至第3天处死小鼠。体外实验所用到的BMDM细胞经雄性小鼠骨髓提取后L929细胞上清液诱导7天,加入LPS诱导巨噬细胞炎症模型,并加入槲皮素干预。细胞分组为:对照组,LPS组,溶剂DMSO对照组,DMSO+LPS组,LPS+4μM槲皮素组和LPS+8μM槲皮素组。本研究随后采用多种方法对体内和体外实验的样本实施检测,包括采用Real-time PCR检测BMDM细胞和肾脏的炎症因子表达;采用Western blot检测蛋白水平;通过ELISA分析小鼠血清和细胞培养上清液中的炎症因子浓度;采用血清肌酐和尿素氮试剂盒检测小鼠肾脏功能指标;采用H&E和PAS染色分析肾脏病理改变;使用免疫荧光和免疫组化检测相应蛋白在组织和细胞中的表达位置和强度;采用流式细胞术检测肾脏细胞悬液和BMDM细胞中Mincle相关信号蛋白和巨噬细胞极性标志物在巨噬细胞中的表达变化。结果:1、槲皮素在体外显著改善了LPS诱导的BMDM细胞炎症形态,抑制了炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达和分泌(P<0.001),下调了炎症相关蛋白iNOS和磷酸化NF-κB的蛋白水平(P<0.001);2、体内实验结果表明,与正常组相比,顺铂诱导的AKI小鼠肾脏功能指标血清肌酐和尿素氮显著升高(P<0.0001),肾小管坏死评分也大幅增加(P<0.0001),给予槲皮素后,AKI小鼠肾功能指标均显著降低(P<0.001),肾小管坏死评分下调(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α在肾脏中的表达和血液中的分泌显著减少(P<0.001),显示出槲皮素改善AKI肾脏功能,抑制炎症的作用;3、槲皮素在体内外均下调了Mincle的mRNA表达(P<0.01)和蛋白水平(P<0.01),以及下游信号分子Syk的活化(P<0.001)。体内结果还表明,巨噬细胞在AKI小鼠肾脏中的浸润显著增加,免疫荧光结果显示Minlce在肾脏中大量表达于浸润的巨噬细胞上,且流式结果说明Mincle及活化的Syk在AKI肾脏巨噬细胞中大量表达,给予槲皮素后巨噬细胞上的Mincle及活化的Syk均显著下调(P<0.001);4、体内外细胞的流式结果表明,槲皮素能显著抑制AKI小鼠肾脏巨噬细胞和LPS诱导的BMDM细胞极性,抑制促炎的M1巨噬细胞活性(标志物为iNOS)(P<0.001),增加抑制炎症的M2巨噬细胞活性(标志物为CD206)(P<0.001);5、在槲皮素处理的LPS刺激后的BMDM细胞中加入Mincle配体,过表达Mincle后,上调了炎症信号iNOS、Syk、NF-κB的蛋白水平(P<0.01),同时显著增加了炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达和分泌水平(P<0.01),同时上调了M1巨噬细胞标志物iNOS的mRNA表达(P<0.001)和下调了M2巨噬细胞标志物CD206的mRNA表达(P<0.05)。结论:1、槲皮素能显著抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症形态,下调炎症因子的表达和分泌,显示出了很强的炎症抑制作用;2、槲皮素改善了AKI小鼠的肾脏功能,减轻了AKI小鼠肾脏的病理改变,下调了AKI肾脏炎症因子的表达和分泌,表明了槲皮素能改善AKI诱导的肾脏损伤和炎症;3、槲皮素在体内外均能显著抑制巨噬细胞中Mincle及其下游分子Syk和NF-κB的表达和活化;4、槲皮素在体内外能抑制促炎M1巨噬细胞表型,增加抑炎M2巨噬细胞表型;5、细胞回复实验结果表明过表达Mincle,逆转了槲皮素抑制的细胞炎症,说明槲皮素是通过下调Mincle降低巨噬细胞炎症。本研究结果证实,槲皮素通过抑制巨噬细胞Mincle及其下游信号分子的表达和活化,进而平衡巨噬细胞极性,下调巨噬细胞炎症响应,改善AKI肾脏功能并减轻肾脏损伤。