论文部分内容阅读
目的:观察疏水氨基酸侧链不同的离子互补型自组装短肽与大黄素的相互作用,考察不同疏水侧链离子互补型自组装短肽对大黄素的载药、释药性能,以离子互补型自组装短肽初步构建疏水药物的混悬液-原位凝胶给药系统,研究其作为疏水药物载体的可行性。方法:1.采用平衡法以紫外分光光度法测定大黄素在水、p H 6.8、p H 7.4、乙醇等介质中的平衡溶解度。2.自组装短肽分别与芘和大黄素的相互作用研究:利用芘分子荧光法测定RADA16-I与RVDV16-I的临界聚集浓度;荧光分光光度法考察RADA16-I与RVDV16-I分别与芘和大黄素的相互作用。以激光粒度仪、扫描电镜等表征自组装短肽与大黄素形成的混悬液;平衡法测定大黄素在两种短肽溶液中的溶解性。3.大黄素与自组装短肽的混悬液-原位凝胶给药系统的构建及控释研究:以粒径为指标考察自组装短肽-大黄素混悬液形成的最优条件。以粒径及大黄素的含量为指标,考察自组装短肽-大黄素混悬液的稳定性。采用流变仪表征自组装短肽-大黄素原位凝胶的形成及流变学特性。采用动态透析膜法考察原位凝胶中大黄素的体外释放。4.采用MTT法测定自组装短肽-大黄素原位凝胶对肿瘤细胞A549和Hep G2的体外增殖抑制作用。结果:1.大黄素在水中的溶解度为6.9μg/m L,在含30%乙醇的p H 7.4 PBS中的溶解度为72.6μg/m L,满足体外释放的漏槽条件。2.RVDV16-I和RADA16-I的临界聚集浓度分别为66.1μM、125.9μM。芘和大黄素荧光发射光谱强度随着短肽浓度增加而增加。短肽与大黄素在机械搅拌下形成黄色混悬液。SEM显示混悬液呈颗粒状均匀分布。自组装短肽-大黄素混悬液在模拟生理条件(p H 7.4)下能原位形成水凝胶。RADA16-I和RVDV16-I的最低成胶浓度分别为3.0 mg/m L和2.5 mg/m L。凝胶呈网状结构将大黄素包裹,短肽浓度越大,包裹越致密。3.1000 r/min搅拌48 h,RADA16-I和RVDV16-I分别与大黄素在水中形成相对稳定的混悬液,在4℃放置30天粒径和含量均稳定。流变学结果显示RADA16-I、RVDV16-I与PBS混合后,G’和G’’分别增大了近10倍。凝胶的G’和G’’随短肽浓度在一定范围内增加而增加,剪切频率增大时,G’和G’’值保持相对恒定。大黄素从低、中、高浓度RADA16-I和RVDV16-I与大黄素形成的原位水凝胶中36 h累积释放率分别为68.7%、66.7%、55.3%和61.8%、56.6%、48.3%。表现出一定的缓释现象,符合一级动力学释放模型。4.在大黄素浓度为120μM的凝胶中,RADA16-EM和RVDV16-EM对A549和Hep G2细胞的抑制率分别为71.7%、64.4%,和65.4%、62.5%,大黄素-水混悬液对A549和Hep G2细胞的抑制率分别为61.5%和59.9%。结论:具有不同疏水性侧链氨基酸的自组装短肽RADA16-I与RVDV16-I均能与疏水的大黄素相互作用,相互作用以疏水相互作用为主导,疏水性较强的RVDV16-I与疏水药物的相互作用较强。在机械搅拌下,两种自组装短肽均能与大黄素在水中形成相对稳定的混悬液,混悬液在模拟生理条件下均能形成原位凝胶,凝胶中大黄素的体外释放呈现一定的缓释现象。自组装短肽-大黄素原位凝胶保持或增强了大黄素固有的抑制肿瘤细胞增殖作用。RADA16-I与RVDV16-I对疏水性药物均有良好的载药和释药能力,可通过调整短肽种类或浓度调节药物的释放,并保持或促进药物的作用,因而在疏水性药物传递系统中具有一定的应用潜力。