论文部分内容阅读
本论文利用分子生物学、免疫学、分子病毒学、生物化学、生物信息学等技术和手段进行了新型治疗性HIV-1 重组核酸疫苗的构建、纯化及实验免疫学研究,内容概述如下: 本实验以选择HIV-1 优势抗原表位为原则,提出以HIV-1 表位基因为基础,以HIV-1 巨分子颗粒p24 为支架载体分子,对抗原基因进行人工分子设计,并辅以计算机模拟来研制治疗性HIV 基因工程疫苗的新思路。该种HIV DNA 疫苗的设计在国内外尚未见报道。将经分子设计的疫苗抗原的核苷酸序列进行人工合成,获得新型HIV-1 治疗性抗原基因(MEG);以PCR 法获得HIV-1 衣壳蛋白基因p24,将其插入到MEG 基因中,获得嵌合基因MEGp24。利用新型安全性真核表达载体质粒pVAXI,构建了新型HIV-1 治疗性重组DNA 疫苗(pVAXI-MEG-p24),经过哺乳动物细胞转染结果表明,pVAXI-MEG-p24 成功地表达了MEGp24 抗原蛋白。将已构建好的治疗性HIV-1 重组DNA 疫苗的质粒(pVAXI-MEG-p24),经发酵罐建立发酵工艺,通过阴离子交换层析方法(Q Sepharose XL)进行纯化,随后将得到的质粒DNA 通过排阻层析方法进行进一步的纯化及脱盐,浓缩。经过质量鉴定结果表明,该纯化质粒疫苗符合FDA 推荐的临床用质粒DNA 的质量标准,表明所建立的工艺是可行。纯化后的重组DNA 疫苗质粒pVAX1-MEG-p24 进行实验免疫研究表明,纯化后HIV-1 重组DNA 疫苗使小鼠和恒河猴,产生了特异性体液和细胞免疫应答;治疗性HIV-1 重组DNA 疫苗(pVAXI-MEG-p24)与HIV 全结构蛋白基因疫苗(pVAXI-gag-gp120)比较研究表明,pVAXI-MEG-p24 能够诱发比全结构蛋白基因疫苗更强的表位特异性CTL 反应和抗体反应。总之,本研究以新的研究思路,对HIV 治疗性重组核酸疫苗的构建进行了