【摘 要】
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溶藻弧菌(Vibrio aliginolyticus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是水产养殖环境中比较常见的条件致病菌,它们分布广泛,致病率高,可以感染多种水产养殖动物,对世界各地的水产
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溶藻弧菌(Vibrio aliginolyticus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是水产养殖环境中比较常见的条件致病菌,它们分布广泛,致病率高,可以感染多种水产养殖动物,对世界各地的水产养殖产业造成巨大的经济损失。而对溶藻弧菌和哈维氏弧菌进行快速检测和监控则是对其疾病进行预防和治疗的前提和基础。核酸适配体,是一种具有高亲和力和特异性的核酸分子,在微生物检测方面显示出巨大的优势和应用潜力。本研究以溶藻弧菌及其灭活菌和哈维氏弧菌及其灭活菌为靶目标,对其核酸适配体进行了亲和特异性研究和亲和常数的测定。结果显示,6个适配体(#7、#9、#37、I22、S27、S35)对其目标菌均有较好的亲和特异性,相应的亲和常数分别为13.56±5.01、34.55±11.34、40.28±13.39、33.42±13.24、26.21±8.73和29.42±7.91 nM,其中,溶藻弧菌的#37适配体和哈维氏弧菌的S35、S27适配体对非目标菌(嗜水气单胞菌、大肠杆菌和迟钝爱德华氏菌)的亲和力较弱,表现出对目标菌更好的亲和特异性。并采用高保真度的碱基配对策略对适配体二级结构进行了模拟与分析。定性检测结果显示,#7适配体能检测出10~2 CFU/m L以上的灭活溶藻弧菌,#9和#37适配体能检测出10~2和10~3 CFU/mL以上的溶藻弧菌。I22适配体能检测出10~2 CFU/mL以上的灭活哈维氏弧菌,S27、S35适配体则能检测出10~2 CFU/m L以上的哈维氏弧菌,初步建立了针对溶藻弧菌和哈维氏弧菌的基于适配体的定性检测技术。定量检测研究表明,#9和I22适配体的标准曲线线性拟合效果较好。利用适配体定量检测弧菌,不需要细菌基因的提取与纯化,不需要PCR扩增,具有特异性强、简易和高效等特点,但在稳定性和准确性方面还需进一步改善。
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