胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells, EG cells)是继胚胎癌细胞和胚胎干细胞之后发现的又一多能性干细胞。本研究以昆明白小鼠胎儿生殖嵴为材料,从原始生殖细胞中分离出EG细胞,并进行传代培养和鉴定,对影响EG细胞分离与培养的因素进行了探讨,为进一步建立昆明白小鼠EG细胞系奠定基础。主要实验结果如下:1)试验比较了三种分离培养方法对获得小鼠原代MEF的影响,发现酶消化法的分离效果好于组织块法和酶结合组织块法,适合原代MEF的分离。制作成纤维细胞饲养层时,10μg/mL丝裂霉素C处理90min可以有效抑制成纤维细胞的增殖,适合用于MEF饲养层的制作。2)试验比较了采用不同胎龄胎儿分离培养EG细胞的效果,发现8.5dpc~10.5dpc胚胎初次分离所获得的EG细胞集落较少,后期传代能力也较差,难以有效建立EG细胞系;而11.5dpc~12.5dpc日龄胚胎初次分离获得的类ES细胞集落较多,后期传代能力较强,最高可传至7代,有利于EG细胞的长期培养。3)试验比较了“一次消化法”和“多次消化法”对EG细胞分离培养方面的影响,发现“多次消化法”可以得到较高的原代EG细胞克隆率,还能保持较高的细胞增殖能力,好于“一次消化法”,适宜于EG细胞的分离和传代。4)使用0.125%胰蛋白酶+0.02%EDTA的消化液进行多次消化,原代EG细胞克隆率和平均传代次数较高,可取得较好的分离效果,但与0.1%的胶原酶Ⅳ组和0.25%胰蛋白酶+0.04% EDTA组相比差异不显著,5)大鼠心肌细胞条件培养液在小鼠EG细胞分离培养过程中, EG细胞克隆形成率和最高传代数均高于EG细胞基础培养液组;在EG细胞的传代培养中,RH-CM组培养效果最好,最高传至7代而不分化。6)试验比较了三种传代方法对小鼠胚胎生殖细胞细胞分离培养的影响,发现“连同饲养层消化法”简单易行,而且传代效果较好,EG细胞克隆形成率和传代数均好于“机械离散法”,同“酶消化法”相比差异不显著,二者最高均传至7代。7)试验比较了不同代数和不同冷冻时间对EG细胞冻后存活率的影响,结果发现,EG细胞冻后存活率的变化不显著,没有随着冻存时间的延长和代数的增加而下降。