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目的:旨在证实胶质瘤原代细胞可以分离出外来体,从外周血诱导分离能够培养出树突状细胞,将胶质瘤细胞培养液分离出的外来体致敏树突状细胞,观察其体外所引起的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。方法:选取临床上高度恶性胶质瘤标本,制作成单个胶质瘤细胞悬浮液,将悬浮液分成两份,取其中一份进行原代细胞培养,收集培养两周的细胞培养液,采用差速离心法分离出胶质瘤细胞所分泌的外来体;取另一份胶质瘤单个细胞悬浮液,通过反复离心和冻融的方法制备出胶质瘤冷冻抗原;采取同一患者外周血,利用淋巴细胞裂解液并采用离心的方法,从外周血中获取单核细胞和T淋巴细胞,其中这些单核细胞在细胞因子IL-4、GM-CSF作用下进行培养,使其转变成为不成熟的树突状细胞,然后添加细胞因子TNF-α继续培养,使其变为成熟的树突状细胞;将胶质瘤来源的外来体、胶质瘤冷冻抗原分别冲击树突状细胞并与T淋巴细胞共同培养,通过MTT法检测两种免疫方法体外对胶质瘤细胞的杀伤效应,并对所得结果采用SPSS16.0进行统计学分析。结果:胶质瘤细胞原代培养过程中,在倒置相差显微镜下观察生长良好,贴壁细胞成长梭状,大小均匀、形态单一,呈弥漫型分布; exosome在透射电镜下观察,可以看到多个呈类圆盘状、大小不等的半球体,直径大小约40~100nm,该半球体由脂质双层膜包绕,外层的脂质双分子层染色较深,内部为均匀的淡然区域;通过观察发现,单核细胞培养2~4个小时成贴壁状态,此时单核细胞体积较小、呈较光滑的圆形。继续进行培养,2~3天时细胞的形状发生变化,由以前的圆形逐渐变成无规则形状,体积较以前变大,表面出现一些较小的突起(Fig4)。第5天时,细胞呈簇状分布同时伸出许多较大的树突状突起,体积较以前更大,另外还可以观察到有少量的悬浮细胞(Fig5)。向树突状细胞培养液中分别加入exosome或胶质瘤冷冻抗原,共养到第7天时,加入细胞因子TNF-α继续培养24小时,此时大部分细胞呈悬浮状态,细胞表面伸出大量树突状突起,为典型的树突状细胞形状;当效靶比为10:1、25:1、50:1情况时,冷冻抗原-DC+T细胞对恶性胶质瘤细胞杀伤率分别是17.50%±1.13%、21.18%±1.36%、30.20%±1.46%。Exosome-DC+T细胞组对恶性胶质瘤细胞杀伤率(%)分别是32.25%±1.36%、43.04%±1.22%、70.42%±1.40%。两组进行对比可以发现存在显著性差p<0.05)。结论:胶质瘤细胞原代培养液经过差速离心的方法,可以分离出外来体,这种外来体具有很好的免疫活性。利用淋巴细胞裂解液并采用离心方法,可以在外周血中获取大量单核细胞和T淋巴细胞,这些单核细胞在细胞因子IL-4、GM-CSF和TNF-α的作用下,最终转变为成熟的树突状细胞。将胶质瘤细胞来源的外来体致敏树突状细胞后,它可以激活细胞毒性T淋巴细胞反应,从而特异性杀伤胶质瘤细胞,并且其特异性杀伤胶质瘤细胞能力,明显优于胶质瘤冷冻抗原致敏树突状细胞所产生的细胞毒效应。