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目的探讨巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重中的作用。方法选择COPD患者30例,健康体检者24例为研究对象。分离外周血单核细胞,体外诱导培养单核细胞源性巨噬细胞(MDM)。将COPD患者的MDM分为空白对照组(A组),LPS刺激组(B组),TLR4单克隆抗体(TLR4McAb)联合LPS干预组(C组)；健康者的MDM也分为空白对照组(D组),LPS刺激组(E组),TLR4McAb联合LPS干预组(F组)。采用倒置显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测巨噬细胞表面CD14鉴定MDM；实时荧光定量PCR方法检测TLR4和TLR4、NF-κB的表达：免疫荧光染色检测TLR4和NF-κB的蛋白表达；酶联免疫吸附法检测MDM培养上清液中TNF-α的含量。统计学处理采用单因素方差分析(?)Pearson相关分析。结果①MDM的形成：单核细胞培养至12天时,细胞体积明显增大,大多数细胞为圆形或椭圆形,少数为多角形或长梭形,细胞周边可见板状伪足或突起,成为MDM；单核细胞CD14阳性率为(90.88±6.3)%,而MDM CD14阳性率降至(43.35±9.5)%。差异有统计学意义(t=14.03,P<0.01)。②A组TLR4mRNA和蛋白(3.83±0.27,34.08±1.62)、NF-κB mRNA和蛋白(3.71±0.16,58.05±4.66)及TNF-α浓度[(43.42±2.68)μg/L]分别高于D组(1,14.03±1.63)、(1,32.46±1.87)及[(21.22±0.70)μg/L]; LPS刺激后B组和E组TLR4mRNA和蛋白、NF-κB mRNA和蛋白、TNF-α的分泌均增高,B组分别为(4.89±0.12,67.12±1.54)、(4.59±0.25,83.09±5.16)和[(51.19±1.09)μg/L],但E组分别为(4.19±0.29,75.72±3.59)、(2.22±0.24,93.69±3.61)和[(43.19±2.67)μg/L],B组增高幅度明显低于E组；TLR4McAb联合LPS干预后,C组和F组TLR4mRNA和蛋白、NF-κB mRNA和蛋白、TNF-α均较单用LPS时降低,C组分别为(4.37±0.41,46.21±2.32)、(4.14±0.21,65.32±3.85)和[(47.45±1.03)μg/L],F组分别为(2.53±0.24,33.14±1.62)、(1.75±0.32,61.20±2.18)[(31.45±1.11)μg/L],但均高于静息状态；组间比较差异均有统计学意义(F值为91.94～334.02,均P<0.01)。③相关性分析显示,静息状态下,COPD患者TLR4蛋白的表达与NF-κB蛋白的表达、TNF-α的浓度均呈正相关(r值分别为0.443、0.502,P分别<0.05、0.01),NF-κB蛋白表达与TNF-α的浓度呈正相关(r=0.515,P<0.01); LPS刺激后,COPD患者TLR4蛋白的表达与NF-κB蛋白的表达、TNF-α的浓度均呈正相关(r值分别为0.624、0.438,P分别<0.01、0.05),NF-κB蛋白表达与TNF-α的浓度呈正相关(r=0.453,P<0.05)。结论COPD患者处于炎症活化状态,巨噬细胞TLR4及NF-κB mRNA和蛋白高表达,TNF-α分泌增加；COPD患者巨噬细胞对LPS刺激反应低下,LPS刺激后巨噬细胞TLR4、NF-κB表达及TNF-α分泌的增高辐度明显降低,可能与COPD患者识别细菌功能受损、造成AECOPD频繁发生有关；LPS刺激的NF-κB活化及TNF-α分泌作用部分通过TLR4途径完成。