药用植物穿心莲组培快繁及其影响因子的研究

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本试验研究穿心莲的组培快繁及其影响因子,建立和优化穿心莲快速繁殖体系。试验结果如下:   1、将穿心莲种子灭菌培养获得试管实生苗,用实生苗叶片为外植体,进行愈伤组织的诱导、继代和分化试验,确定诱导愈伤组织的最佳培养基是MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA2.0mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%,愈伤组织诱导率高达100%,少数发生褐化;添加3mg/L的AgNO3可诱导胚性愈伤组织的产生,同时减少褐化的愈伤块数。愈伤组织继代3次后进行分化试验,得出穿心莲愈伤组织分化的最佳培养基是:MS+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%,分化率最高达84%,分化不定芽长势良好。   2、不定芽的增殖:将大田生长健壮的穿心莲带腋芽茎段进行灭菌培养,获得试管苗,诱导不定芽形成。不同激素组合、光照强度、温度、糖浓度以及继代次数对穿心莲试管苗的快繁都有很大的影响,优化培养条件,得出最适合不定芽增殖的培养基配方是MS+KT1.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖6%+琼脂0.7%,丛生芽数多达160个,不定芽增殖率高达533.7%;30001x是最佳的光照强度;30℃是最适合的温度,适宜继代次数为3代以内。   3、试管苗生根试验:将健壮试管苗接入生根培养基生根,得出最适合试管苗生根的培养基是1/2MS+NAA1.0mg/L+蔗糖2%+琼脂0.6%,生根率高达80%,平均生根数达到6条/株,平均根长为2.5cm,长出的根粗壮。   4、降低玻璃化苗试验:提高培养基琼脂浓度和添加KNO3可以有效减少试管苗玻璃化,但是不定芽高增值率和低玻璃化率存在矛盾,琼脂浓度为0.7%时培养基的软硬度适中,有利于穿心莲不定芽的增殖,而且玻璃化率不高,只有5%左右;抑制穿心莲玻璃苗产生的最佳KNO3浓度是1000mg/L。   5、玻璃化苗逆转试验:穿心莲试管苗玻璃化程度可分为3个等级,将不同等级的玻璃化苗分别接种在优化培养基MS+KT1.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖6%+琼脂0.7%上,利用自然散射光培养,结果表明优化培养条件可以使部分玻璃苗发生逆转,恢复正常生长。   综上所述:以穿心莲茎段或顶芽为外植体进行快速繁殖试管苗,已建立并优化了穿心莲快速繁殖体系,为实现工厂化育苗以及相关方面的研究提供了可靠的理论依据。
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