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背景和目的:脐血是造血干细胞的重要来源之一,但是脐血中含有的有核细胞数相对较少制约了其在成人患者中的应用。CD34是造血干/祖细胞的表面标记。脐血造血干/祖细胞的体外扩增是解决这一问题的方法之一,但是目前仍未找到最佳的扩增方法和体系。 弱激光(LLLT)是指波长在600-1100nm,输出能量在1-500mW的红色或近红外激光。由连续或者脉冲类型的弱激光在较低的能量密度(0.04-50 J/cm2)下直接作用于靶组织或者单层细胞,不直接引起生物组织发生不可逆性损伤,而产生一系列的生物刺激作用。 既往大量研究表明弱激光对生物组织有多方面的刺激作用,如促进细胞增殖、迁移、黏附,影响细胞凋亡等等,其可诱导细胞增殖的效应已在多种细胞系中得到证实,比如可以促进表皮细胞、骨细胞、神经细胞、成纤维细胞的增殖,从而可以促进伤口的愈合、骨的修复、神经的再生等。 弱激光对造血干/祖细胞的作用的研究甚少,有人应用685nm弱激光以0.1-2.0 J/cm2照射动员后外周血造血干细胞,然而弱激光对脐血造血干/祖细胞的研究国内外尚无文献报道。本研究初步探讨弱激光对脐血CD34+造血干/祖细胞CFU-GM形成能力的影响,为弱激光对造血干/祖细胞的研究提供新的思路。 方法: 1.收集鹤壁市京立医院产科足月分娩婴儿的脐血,采用免疫磁珠法分选脐血 CD34+细胞,在35mm培养皿中采用甲基纤维素半固体培养基法建立集落形成细胞检测(最终每个培养皿中细胞数为1×103),然后经0、0.5、1、2、4 J/cm2850nm弱激光照射后在37℃,5%CO2下培养14天,观察其形成集落数的差别。 2.将上述分选后的CD34+细胞构建甲基纤维素集落形成细胞检测,分为对照组、1 J/cm2弱激光组、NAC(N-乙酰半胱氨酸)组以及弱激光(1 J/cm2)+NAC组给予相应处理后,在37℃,5%CO2下培养14天,观察其形成集落数的差别。 结果: 1.经不同能量密度弱激光照射后形成的CFU-GM计数有统计学差异,通过各实验组与对照组的两两比较发现,0.5、1、2、4 J/cm2弱激光照射后CFU-GM计数与对照组相比均有统计学意义,经0.5 J/cm2和1 J/cm2弱激光照射后,CFU-GM计数较对照组升高,而经2 J/cm2和4 J/cm2弱激光照射后的CFU-GM计数较对照组下降。1 J/cm2弱激光照射后的脐血CD34+细胞CFU-GM计数最高; 2.经弱激光和/或NAC处理后组间CFU-GM计数差异有统计学意义,经两两比较后发现,对照组与弱激光组、对照组与NAC组、弱激光组与弱激光+NAC组、NAC组与弱激光+NAC组CFU-GM计数均有统计学差异,经弱激光处理后CFU-GM计数较对照组升高,而对比弱激光组与弱激光+NAC组CFU-GM计数可发现,NAC可逆转弱激光引起的CFU-GM计数升高。 结论: 1.850nm弱激光在0.5-4.0 J/cm2可影响脐血CD34+细胞CFU-GM形成,在1 J/cm2时 CFU-GM计数最多。 2.NAC可逆转1 J/cm2弱激光引起的CFU-GM计数升高,可能与NAC调节细胞内活性氧水平有关。