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奶牛作为一种重要的经济动物,在畜牧养殖业中的处于非常重要的地位;养殖水平和经济效益的重要标准是由奶牛的乳产量和乳品质来衡量的。在世界水平上,尽管我国是奶牛养殖大国,但是我国奶牛的年平均单产量仍低于世界平均水平。由于乳脂率和乳蛋白含量很低,尚不能满足消费者的消费需求。乳是由乳腺自身合成和分泌的,在神经-内分泌-免疫网络调解下,乳腺发育及泌乳过程中重要功能基因的表达发生变化,这些变化的基因在调节乳腺生长、发育、分化和乳汁的合成、分泌、转运过程中发挥着非常重要的生理作用。乳腺上皮细胞执行泌乳功能。乳腺上皮细胞的生物学功能不仅受到神经内分泌系统的调节,同时也受到免疫系统的调节。在神经内分泌网络系统的综合作用下维持泌乳的正常进行。细胞因子在免疫系统中发挥着非常重要的调节作用。细胞因子可以直接作用于乳腺上皮细胞,调节乳蛋白、乳脂的生物合成和分泌;同时奶牛乳房炎是严重危害因素,引起机体细胞因子种类和数量发生改变,为掌握细胞因子对泌乳的影响,在细胞水平上系统研究其对泌乳细胞合成乳脂乳蛋白的调节,为人工调控乳品质量提供基础。首先以组织块法,对奶牛乳腺上皮细胞进行克隆和特性分析,建立奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型。通过形态学、生物学及其功能检测实验表明,奶牛乳腺上皮细胞呈典型的卵圆形;染色体数与哺乳动物正常数目一致,即30对;生长曲线表明其符合正常的体外生长周期;能够分泌β-酪蛋白,因此可作为乳腺上皮细胞体外研究的泌乳模型,为后期泌乳调控机制的研究建立平台。利用建立的奶牛乳腺上皮细胞的泌乳模型,添加不同浓度的IGF-I(0、10、100、200ng/mL)和HGF(0、0.1、1、10ng/mL)刺激24h后,实时荧光定量检测β-酪蛋白(CSN2)和乙酰辅酶A羧化酶α(ACACA)的转录水平。研究IGF-I和HGF在奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控中的作用。结果表明,随着IGF-I浓度的增加,CSN2在奶牛乳腺上皮细胞中的mRNA水平逐渐增加,呈浓度依赖性;同样,ACACA在奶牛乳腺上皮细胞中的mRNA表达量与CSN2具有一致的变化趋势。而HGF却表现相反的趋势,即:随着HGF浓度的增加,CSN2和ACACA在奶牛乳腺上皮细胞中的mRNA水平逐渐降低,呈浓度依赖性。因此,本研究得出这样的结论:在一定浓度范围内,IGF-I能够显著促进乳脂乳蛋白的合成,而HGF则显著抑制乳脂乳蛋白的合成,呈浓度依赖性。