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目的采用特异性酯酶染色和免疫组织化学法观察肿瘤浸润性中性粒细胞(TINs)在宫颈组织癌变过程中的表达变化,及其对CD8~+T淋巴细胞及部分肿瘤促进因子表达的影响;分析CSCC组宫颈癌组织中TINs浸润数、CD66b~+TINs的表达与CSCC患者临床病理参数的关系。了解TINs的浸润在宫颈癌变发生中的作用,为宫颈癌的防治及治疗提供实验依据。方法选取2014年9月至2017年9月在华北理工大学附属唐山市工人医院接受子宫切除术或宫颈活检的患者159例,严格遵从宫颈组织标本收集的纳入和排除标准收集标本。其中36例患者行子宫全切除术治疗良性子宫疾病(对照组,正常宫颈组织标本)和宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ级(CINⅠ)患者47例(CINⅠ组,留取瘤变宫颈组织标本)、CINⅡ/Ⅲ级患者34例(CINⅡ/Ⅲ组,留取瘤变宫颈组织标本)、子宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma of the cervix,CSCC)患者42例(CSCC组,留取宫颈癌组织标本)。实验研究经唐山市工人医院伦理委员会批准,标本获取均须取得患者知情同意,并根据2009年国际妇产科联盟(FIGO)标准由两位病理医师分组标本组织。病理类型及分级遵循WHO标准确诊病理结果。记录患者的基本信息(见表2),并对相关数据进行统计学分析。采用特异性酯酶染色法检测不同病理宫颈组织中的TINs浸润情况。免疫组织化学用于检测每组组织样本中的CD66b~+TINs(CD66b为浸润的TINs表面特异性分子标志物)和CD8~+T的表达。根据CD66b~+TINs细胞数百分比的平均数,将CSCC组分为CD66b~+TINs高表达组和CD66b~+TINs低表达组。采用RT-qPCR检测CSCC组患者中CD66b~+TINs高表达组及CD66b~+TINs低表达组中部分肿瘤促进因子:组织降解酶类(MMP-9、MMP-3、MMP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞因子(IL-11、IL-8、IL-18)、趋化因子(CCL2、CCL5、CXCL10)的mRNA表达。分析CSCC组宫颈癌组织中TINs浸润数、CD66b~+TINs表达与CSCC患者临床病理参数的关系。结果1研究对象概况的统计分析:对照组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组和CSCC组患者一般情况(年龄、初潮年龄、月经周期、经期天数、怀孕次数、流产次数)各因素差异无统计学意义(P均>0.05),表明各组间实验样本具有可比性。2特异性酯酶染色法结果显示:浸润到肿瘤微环境中的中性粒细胞的阳性反应是棕红色颗粒定位于细胞溶质中。在对照组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组、CSCC组宫颈组织中阳性染色细胞数百分比分别为14.36%±2.09%、20.57%±3.86%、33.61%±5.94%、56.71%±8.13%,差异有统计学意义(χ~2=140.89,P<0.01)。CINⅠ组TINs表达明显高于对照组(P<0.05);CINⅡ/Ⅲ组的表达显著高于CINⅠ组和对照组(P均<0.05);CSCC组的表达显著高于CINⅡ/Ⅲ组、CINⅠ组和对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。3免疫组织化学法染色结果:CD66b~+TINs在对照组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组、CSCC组宫颈组织中浸润的细胞数百分比依次升高,分别为8.07%±1.63%、10.97%±2.98%、15.71%±3.47%、24.83%±4.29%,差异有统计学意义(χ~2=124.24,P<0.01)。组间两两比较,P值均<0.05。各组间宫颈病变组织中CD8~+T细胞数百分比先上升后下降,分别为7.41%±1.35%、10.13%±3.22%、6.36%±2.51%、3.07%±1.09%,(χ~2=103.75,P<0.01),组间两两比较,P值均<0.05。其中CD66b~+TINs与CD8~+T细胞在CINⅡ/Ⅲ组(r=﹣0.139,P=0.030)和CSCC组(r=﹣0.275,P=0.034)宫颈组织中的浸润表达均呈负相关。4依据CD66b~+TINs在宫颈癌组织中的浸润程度分为高表达组和低表达组,两组宫颈组织均提取总RNA并进行RT-qPCR检测,其中肿瘤促进因子组织降解酶类(MMP-9、MMP-3、MMP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞因子(IL-11、IL-8、IL-18)、趋化因子(CCL2、CCL5、CXCL10)的mRNA相对表达量结果显示:与CD66b~+TINs低表达组相比,在高表达宫颈组织中均上调,MMP-9上调2.756倍,MMP-3上调1.252倍,MMP-1上调1.475倍,VEGF上调1.310倍,IL-11上调2.215倍,IL-8上调1.654倍,IL-18上调3.082倍,CCL2上调1.627倍,CCL5上调2.173倍,CXCL10上调1.462倍,P均<0.05。5 TINs浸润数百分比、CD66b~+TINs的表达与CSCC患者临床病理参数的相关性分析结果显示:CSCC组TINs浸润数百分比、CD66b~+TINs的表达与患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤分化程度和临床分期无关(P均>0.05),但都与淋巴结转移相关(P<0.05)。结论宫颈癌变过程中TINs浸润增加;TINs浸润的增加抑制宫颈微环境中免疫细胞CD8~+T细胞的表达,同时促进多种肿瘤相关促进因子的表达,直接或间接促进宫颈癌的发生发展,TINs可能成为治疗宫颈癌的新靶点。在对TINs的鉴别实验中,特异性酯酶染色法具备快速、灵敏、特异性较高的特点,可替代免疫组化法。图5幅;表8个;参220篇。