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猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus）引起的一种高传染性的猪肠道疾病,具有很高的发病率和死亡率。TGEV可感染任何日龄猪,主要感染新生仔猪造成仔猪的急性腹泻。虽然市场上有较多的疫苗用于TGEV的预防,但是目前还没有有效的制剂能够治疗TGEV的感染,本研究通过猪IFN-γ（Interferon-γ,IFN-γ）的原核表达进行猪IFN-γ抗TGEV活性和相关机制的研究。IFN-γ主要具有调节宿主免疫应答的能力,但是其最初被发现是由于具有抗病毒活性,而目前IFN-γ在抑制TGEV感染中的功能知之甚少。本研究使用大肠杆菌原核表达系统进行IFN-γ的表达纯化,该系统具有易于操作,生产量大,速度快,成本低等优点,目前是一种应用最广泛的表达系统。本研究首先将优化的Fc片段克隆至原核表达载体pET-21b中获得pET-21b-Fc重组载体,然后将IFN-γ克隆连接至pET-21b-Fc载体中,成功获得重组质粒pET-21b-IFN-γ-Fc,将其转化到E.coli Shuffle表达菌种,经过条件摸索对其进行诱导表达,并对菌体上清进行Protein A纯化。通过SDS-PAGE发现大肠杆菌可溶性表达IFN-γ,Western-Blot验证获得IFN-γ。对IFN-γ进行抗TGEV研究,通过检测荧光定量PCR,TCID50测定,间接免疫荧光等方法,结果显示IFN-γ能够呈剂量依赖性抑制TGEV或TGEV-GFP在ST细胞和IPEC-J2细胞中的复制。对其机制进行进一步探索发现IFN-γ显著上调猪干扰素调节因子1（Porcine Interferon regulatory factor 1,poIRF1）的表达,而且poIRF1能够影响IFN-γ介导的信号通路,对poIRF1敲低发现可以完全消除IFN-γ对TGEV的抑制作用,由此可以看出,IFN-γ主要通过poIRF1信号通路抑制TGEV的复制。此外,本实验使用I型干扰素缺失的Vero E6细胞证明IFN-γ具有直接抗TGEV活性,不完全依赖IFN-α/β,但是同时发现IFN-γ在ST细胞和IPEC-J2细胞中表现出比Vero E6细胞中更有效抑制TGEV感染的现象,说明I型干扰素在II型干扰素抑制TGEV的复制作用过程中扮演重要的角色。因此我们对IFN-γ处理ST细胞后进行检测,发现IFN-γ能够诱导I型干扰素的上调表达,且IFN-γ和IFN-α的共处理对TGEV的抑制有非常明显的协同作用,这表明IFN-γ可通过诱导I型干扰素表达并与I型干扰素具有协同抗TGEV复制的作用。本研究利用大肠杆菌成功表达IFN-γ,并发现IFN-γ能抑制TGEV的复制,而其抑制作用主要通过poIRF1介导,并且IFN-γ能够诱导I型干扰素的表达,与I型干扰素具有协同抑制TGEV复制的作用,这为预防和治疗TGEV奠定一定的基础。