苹果梨变异单系生物学特性调查比较及RAPD多态性分析

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本试验以苹果梨及其11个变异单系为材料(分别采自延边州农业科学研究院、珲春市农垦特产局和延边大学农学院),通过田间调查比较,果实品质分析,初步筛选出与苹果梨存在一定差异的优良单系。并以苹果梨及其变异单系的成熟嫩叶为试材提取DNA,对其进行RAPD多态性分析。结果表明:苹果梨在大面积栽培过程中发生了遗传变异,供试苹果梨单系在果实品质方面表现出一定的差异,部分变异单系个别性状或综合性状优于苹果梨。通过分析,综合性状表现较好的变异单系是P1、P5、P7、P8。采用CTAB改良法快速提取到了较高质量苹果梨及其变异单系基因组总DNA用于RAPD扩增,并在RAPD反应中筛选出18个10碱基随机引物,它们的多态性百分率大多在67.7以上,确定了RAPD-PCR苹果梨及其变异单系最适反应体系为:模板DNA浓度为15ng/μL,Mg2+浓度为1.0mmol/L,Taq DNA聚合酶1U,dNTP的浓度为1.0mmol/L,10碱基引物浓度为15pmol,10×缓冲液浓度为2.5mmol/L,其余用重蒸馏水补充。扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸1.5min,共45个循环:最后72℃延伸7min;终止温度为4℃。建立了苹果梨及其11个变异单系的指纹图谱。找到了P2和P7两个变异单系的特征标记,其中P7为大果型变异;苹果梨11个变异单系可以用一个引物的一条带和苹果梨区分开。
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