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Endo S是一种来源于化脓链球菌的β-N-乙酰葡萄糖苷内切酶,特异性水解免疫球蛋白IgG上Fc片段N糖链。由于抗体糖基化修饰影响抗体介导的细胞毒性作用（ADCC）及补体依赖的细胞毒性作用（CDC）等一系列免疫反应,Endo S逐渐被开发作为抗体糖基化修饰功能改造工具酶及自身免疫疾病治疗潜在药物,导致对其需求量越来越大,但是目前关于Endo S发酵优化及提高其利用效率的研究很少,本论文以Endo S外源表达重组大肠杆菌菌株构建为出发点,摇瓶水平优化Endo S发酵表达并对其进行初步固定化研究,同时进行了Endo S天然小分子底物唾液酸糖肽（sialyglycopeptide,SGP）的提取,用于Endo S酶活性研究。本论文主要内容和结果如下:通过有机试剂脱脂、固相萃取、半制备液相分离、凝胶纯化四个提取步骤,成功从鸡蛋黄中分离纯化出纯度可达95%的Endo S天然底物唾液酸糖肽SGP。在前人研究的基础上,本文对脱脂有机试剂种类进行了优化,以石油醚代替安全性差、刺激性强的乙醚,同时利用G25凝胶对SGP进行精制,进一步提高了SGP提取纯度。采用基因工程手段以大肠杆菌BL21（DE3）为宿主,实现了Endo S基因在载体pET28a上的克隆表达,并验证其糖苷水解活性。在摇瓶水平对重组菌发酵培养基组分及发酵条件进行单因素优化,优化后的培养基组成为(g·L-1):牛肉浸膏25.4、酵母粉10.0、NaCl 5.0、甘油4.0、pH 8.0;发酵条件为:20oC、0.25 mM IPTG诱导表达24 h,蛋白表达量225 mg·L-1发酵液。相比优化前蛋白表达量提高了3.5倍,是目前报道Endo S最高产量的5.6倍。最后我们证明通过组氨酸标签在琼脂糖树脂上亲和固定的Endo S操作稳定性良好,连续六次水解SGP产率均维持在90%以上,没有明显下降;储存三个月后水解产率依然可达84%;且保留良好的抗体蛋白糖链水解能力,0.21 mg固定化Endo S于25℃条件下30 min内可完全水解5 mg利妥昔单抗Fc糖链。进一步设计流式微反应器应用于固定化Endo S催化的SGP水解反应中,结果显示与分批反应相比,同等反应时间内产率持平,且最终平衡产率相当。同时实现了载体与反应液的快速分离,减少载体损失,为后续固定化Endo S在抗体修饰中的放大应用提供初步实践基础。