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目前猪瘟(Classical swine fever virus，CSFV)、猪伪狂犬(Porine pseudorabies virus，PRV)、猪繁殖与呼吸综合症(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)是导致猪繁殖障碍疫病的主要病原。这三种病原常出现混合感染，增加了鉴别诊断难度。多重PCR方法具有特异性好、敏感性高且可同时检测多种病原的优点更适于疫病诊断。 本实验针对CSFV、PRRSV和PRV的高保守区域设计了3对引物分别用于扩增其目的基因序列，扩增产物大小分别为570bp、232bp、173bp。对三个单一PCR方法分别进行了退火温度、引物浓度、酶浓度和Mg2+浓度的优化，最终确定退火温度为54℃，上下游引物(10μmol/L)加入量为1μL，酶（5μ/μL）加入量为0.5μL，Mg2+(25 mM)终浓度为3mM。在此基础之上，建立了检测PRRSV和PRV的双重PCR方法及检测CSFV、PRRSV和PRV的多重PCR方法。经条件优化后的双重PCR方法退火温度为54℃，PRRSV和PRV上下游引物(10μmol/L)最佳用量为1μL，酶（5μ/μL）加入量为0.5μL，Mg2+(25 mM)终浓度为4mM。多重PCR检测方法的反应条件中退火温度确定为54℃，Mg2+(25 mM)终浓度确定为5mM，各上下游引物(10μmol/L)加入量确定为1μL，酶(5μ/μL)加入量为1μL。该方法可以检测到的CSFV、PRRSV和PRV最低含量分别为23.88pg、13.1pg、14.6pg。 利用本试验所建立的多重PCR检测方法对从河北省9个市县收集的168份临床出现繁殖障碍症状猪的组织样品进行检测。结果显示，CSFV、PRRSV、PRV的单纯感染分别为41例、36例和11例，阳性率分别为24.4％、21.4％和6.6％。CSFV与PRRSV、PRRSV与PRV、CSFV与PRV的混合感染分别为10例、1例和2例，阳性率分别为5.9％、1.2％与0.6％。CSFV、PRRSV与PRV混合感染有1例。说明猪场猪群中普遍存在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合症和猪伪狂犬病，同时提示我们要对猪瘟与猪繁殖与呼吸综合症引起重视并加强防疫。