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[目的]:E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)在人类多种肿瘤中过度表达,我们前期实验也发现E2F1基因在EBV转化的淋巴母细胞LCLs中高表达。本实验通过构建稳定低表达E2F1基因的Raji细胞,通过q RT-PCR和Western blot检测E2F1基因的表达情况,采用CCK-8实验、软琼脂克隆形成实验、检测细胞周期和迁移侵袭实验观察干扰E2F1基因表达后Raji细胞的增殖和迁移能力,观察E2F1基因表达改变前后EBV阳性淋巴瘤Raji细胞增殖和迁移能力的影响,为EBV相关肿瘤的分子机制研究提供依据。[方法]:采用q RT-PCR及Western Blot检测EBV转化淋巴母细胞(LCL7)与EBV阳性Raji细胞中E2F1基因的表达情况,构建针对E2F1基因的慢病毒干扰载体E2F1-sh RNA-GFP-PURO,建立E2F1稳定低表达的Raji细胞系(Raji/E2F1 sh RNA1、Raji/E2F1 sh RNA2),通过倒置荧光显微镜观察细胞内绿色荧光情况,采用q RT-PCR和Western Blot验证E2F1基因的干扰效果。通过CCK-8实验和迁移侵袭实验观察干扰E2F1基因表达对EBV阳性淋巴瘤Raji细胞系增殖和迁移的影响。[结果]:1.EBV阳性淋巴瘤Raji细胞中E2F1的表达水平高于EBV转化淋巴母细胞(LCL7)本研究采用q RT-PCR和Western blot方法检测Raji细胞和LCL7细胞中E2F1基因的表达情况,发现Raji细胞中E2F1基因的表达量高于LCL7细胞,差异具有统计学意义(P<0.01)。提示可选用Raji细胞进行后续实验。2.成功建立稳定低表达E2F1基因的Raji细胞系经测序结果显示目的基因的干扰质粒E2F1-sh RNA1-GFP-PURO与设计的干扰序列完全吻合,表明载体构建成功;通过倒置荧光显微镜观察转染组和组细胞的绿色荧光携带率,达80%;通过q RT-PCR、Western Blot比较转染E2F1-sh RNA-GFP-PURO质粒的细胞Raji/E2F1sh RNA1、Raji/E2F1 sh RNA2中E2F1干扰效率,选择干扰效率更高的Raji/E2F1 sh RNA1进入后续实验;之后比较q RT-PCR、Western Blot结果显示转染E2F1-sh RNA1-GFP-PURO质粒的细胞(干扰组,Raji/E2F1 sh RNA1)中E2F1的表达水平较转染Raji-SH-GFP-PURO质粒的细胞(空载体组,Raji/NC)和普通Raji细胞(空白组)明显降低,提示干扰效果良好,可继续进行后续实验。3.干扰E2F1基因的表达可抑制EBV阳性淋巴瘤Raji细胞增殖和迁移能力CCK-8实验结果显示:干扰组Raji/E2F1 shRNA1较空载体组Raji/NC增殖明显减慢,差异具有统计学意义(P<0.05),表明干扰E2F1基因表达可抑制Raji细胞的增殖。软琼脂克隆形成实验结果显示:干扰组Raji/E2F1 sh RNA1较空载体组Raji/NC克隆形成能力降低(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞周期结果显示:干扰组Raji/E2F1 sh RNA1较空载体组Raji/NC的S前期比例显著增高,G1与G2期细胞百分比下降,差异有统计学意义(P<0.05),表明干扰E2F1基因表达可导致淋巴瘤Raji细胞S期阻滞。迁移实验结果显示:干扰组Raji/E2F1 sh RNA1较空载体组Raji/NC,迁移细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明干扰E2F1基因表达可使淋巴瘤Raji细胞迁移能力明显减弱。侵袭实验结果显示:干扰组Raji/E2F1 sh RNA1穿过Matrigel基质胶的细胞数显著低于空载体Raji/NC,差异有统计学意义(P<0.05),表明干扰E2F1基因表达可抑制淋巴瘤Raji细胞的侵袭能力。[结论]:干扰E2F1基因表达可抑制EBV阳性淋巴瘤Raji细胞增殖和迁移能力。