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百合花是是世界著名的五大鲜切花之一,是切花中的名贵花卉。百合花朵硕大,花色各异,姿态优雅,芳香浓郁,倍受人们喜爱。全世界切花百合的每年销量数以亿计。但是,百合与其它鲜切花一样随着花朵的开放迅速衰老,如何延长百合花朵的寿命已成为近20年来专家们研究的主要课题之一。尽管目前化学保鲜研究报导很多,也有一定的效果,但保鲜剂使用不方便,有的保鲜剂还是有一定的毒副作用,会造成环境污染,这在一定程度上影响了对鲜切花的保鲜效果,因此能够通过对百合衰老机理研究、克隆其ACC氧化酶cDNA,为用反义RNA技术抑制百合花的衰老进程提供研究基础是本研究的主要目的。 本研究将亚洲百合“精萃”根据花朵的发育程度分为6个级别。分别测定各级别乙烯释放及与百合开花衰老有关的各项生理指标,研究分析了百合花的发育及衰老机制。并在此研究的基础上提取了百合花总RNA,利用GenBank中ACC氧化酶保守序列设计一对简并引物,经RT-PCR、序列测定及Blast检索,获得了与百合ACC氧化酶基因相关的cDNA片段及其序列,并对序列进行了同源性比较分析。研究取得的主要结果是: 1.百合花不同发育期呼吸强度、乙烯释放速率研究结果表明:百合花呼吸强度、乙烯释放速率变化属末期上升型花卉。百合的乙烯释放和呼吸强度变化趋势基本一致。 2.随着花朵的发育,百合花蛋白质含量下降,细胞膜相对透性显著上升,不饱和脂肪酸(IuFA)逐渐下降,丙二醛(MDA)含量上升,过氧化物酶随衰老进程升高,SOD酶在后期下降。 3.经对MDA含量、膜透性、不饱和脂肪酸与乙烯释放及呼吸速度相关分析表明,有显著相关性。 4.ACC氧化酶含量变化峰早于乙烯峰,亚洲百合ACC氧化酶峰出现在第四.第五级,东方百合.ACC氧化酶峰出现在第六级,而亚洲百合乙烯峰出现在第六级。 <WP=10> 5.建立了百合RT-PCR体系。 6以六级盛开的亚洲百合“普利安娜”、东方百合“索邦”为材料,提取花RNA并纯化:RNA;经反转录合成cDNA;并根据牡丹ACC氧化酶基因同源序列设计一对简并引物,得到了亚洲百合“普利安娜”东方百合“索邦”的ACC氧化酶基因片段,并登录GenBank;登录号:东方百合“索邦”:AY656735;亚洲百合“普利安娜”:AY656736。 7.经与GenBank种同源序列的比较分析,亚洲百合“普利安娜”东方百合“索邦”的ACC氧化酶基因片段,与郁金香、番石榴、孟宗竹(毛竹)欧洲白桦、金鱼草、水稻等的同源性均在80%以上,说明该片断确定为ACC氧化酶cDNA序列。