药物中间体环氧化物的微生物法去消旋化的研究

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(S)-苯基环氧乙烷是重要的手性药物中间体,在抗癌药与驱虫药levamisole等的合成上具有重要的应用价值,微生物酶法拆分外消旋苯基环氧乙烷生产(S)-苯基环氧乙烷具有良好的应用前景。以外消旋苯基环氧乙烷为唯一碳源,从土壤分离得到了200余株能在选择性平板上生长的菌株,经变色酸显色法从中筛选得到了53株具有环氧化物水解酶活性的菌株。利用液相色谱分析确定其中的18株有较高的环氧化物水解酶活性,手性液相色谱分析筛选得到能立体选择性水解外消旋苯基环氧乙烷得到(S)-苯基环氧乙烷的菌株G7,转化产物e.e值达到99.3%。提取菌株G716S rDNA,采用通用引物进行PCR扩增,测定16SrDNA序列,所测序列经GenBank比对分析,确定菌株G7为Bacillus subtilis,同源性99%。对菌株G7发酵培养基的碳源、氮源、无机金属离子、初始pH值、培养时间等进行了研究。结果表明,培养基成分为蔗糖10g/L,胰蛋白胨10g/L,Na2HPO4·12H2O2g/L, KH2PO42g/L, MgSO4·7H2O0.25g/L, CaCl20.11g/L, pH6.5,30℃培养25h,G7酶活力达到最高值372.2U/mg。对菌株G7转化苯基环氧乙烷的缓冲液pH值、转化时间、底物浓度、温度等进行研究。结果表明,底物质量浓度为10mg/ml,温度为30℃C,缓冲液pH为7.0时,转化20h,底物转化率最高达49.3%,可获得e.e值最高达99.5%的产物(S)-苯基环氧乙烷。
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