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研究背景与目的:皮肤软组织扩张术已广泛应用于临床,成为整形外科常规治疗手段之一,用于多种组织缺损的修复和器官再造。但是在扩张器植入术后经常会出现一些并发症,如血肿、感染、皮瓣坏死等,其中血肿是最常见的。血肿不仅会对皮瓣产生压迫使组织缺血,而且会对组织产生毒性作用。此外,血肿又与感染和皮瓣坏死密切相关。目前,临床上对于扩张器植入术后血肿的治疗仅限于清除血肿,尚无有效的减轻皮瓣损伤的治疗药物。本研究的目的是探讨非张力性血肿引起扩张器表面皮瓣损伤的机制,为减轻血肿造成的皮瓣损伤寻求有效的治疗药物,并探讨其作用机理。本研究由两部分组成:第一部分去铁胺减轻非张力性血肿中铁对未扩张皮瓣毒性作用的研究方法:13头4~8月龄白色小型猪,在每头猪脊柱两侧各设计5个术区,共128个术区,共植入128个80ml肾形扩张器,形成128个未扩张皮瓣。将未扩张皮瓣随机分配进入对照组、血肿组、去铁胺组、阿加曲班组,每组32个未扩张皮瓣。其中关于阿加曲班组的实验内容将在论文第二部分的实验二中叙述。对照组:扩张器植入后不做其他处理;血肿组:在扩张器植入后向剥离腔隙内注入15ml自体血液;去铁胺组:在扩张器植入后向剥离腔隙内注入15ml自体血液和270mg甲磺酸去铁胺。各组分别在术后24h、72h、120h取材,每组共取材24个未扩张皮瓣。每组取材后剩余的8个扩张器于术后8天注水,注水完毕后取材。检测各组扩张器植入术后2h皮瓣的血流情况,检测未扩张皮瓣铁含量、丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性、扩张皮瓣包膜厚度、包膜胶原含量和扩张皮瓣即时回缩率。结果:(1)三个组扩张器植入术后2h未扩张皮瓣血流灌注量无显著差别(P>0.05);(2)血肿组术后皮瓣铁含量、MDA含量和MPO活性均高于对照组(P<0.01);去铁胺组皮瓣铁含量和MDA含量低于血肿组(P<0.01),MPO活性与血肿组无显著差异(P>0.05);(3)血肿组扩张皮瓣包膜厚度、包膜胶原含量和扩张皮瓣即时回缩率均高于对照组(P<0.01),去铁胺组与血肿组无显著差异(P>0.05)。第二部分阿加曲班减轻非张力性血肿中凝血酶对扩张皮瓣的影响及其机制的研究实验一凝血酶对猪皮肤成纤维细胞增殖作用的研究方法:采用贴壁法进行猪皮肤成纤维细胞原代培养,并传代、鉴定。用MTT法检测不同浓度凝血酶刺激后的成纤维细胞活力。用氯胺T法检测不同浓度凝血酶刺激后的细胞上清中羟脯氨酸含量。用免疫组化的方法检测凝血酶刺激后的成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。在培养液中加入阿加曲班后重复上述检测。结果:(1)培养的细胞为典型的成纤维细胞形态,波形蛋白单克隆抗体免疫组化染色呈阳性。(2)加入不同浓度凝血酶的各组吸光值均高于不加凝血酶组(A组)(P<0.01),加入阿加曲班和凝血酶的各组吸光值与A组无显著性差异(P>0.05)。(3)加入不同浓度凝血酶的各组细胞上清中羟脯氨酸含量均高于不加凝血酶组(A组)(P<0.01),加入阿加曲班和凝血酶的各组上清中羟脯氨酸含量与A组相比无统计学差异(P>0.05)。(4)凝血酶刺激后的成纤维细胞中有α-SMA的表达,加入阿加曲班后此种表达被抑制。实验二阿加曲班减轻非张力性血肿中凝血酶对扩张皮瓣影响的研究方法:本实验设计对照组、血肿组和阿加曲班组。其中对照组和血肿组的实验设计与第一部分中的对照组和血肿组相同。阿加曲班组:在扩张器植入后向剥离腔隙内注入15ml血液和500μg阿加曲班。各组分别在术后24h、72h、120h取材,每组取材后剩余的8个扩张器于术后8天注水,注水完毕后取材。检测未扩张皮瓣MPO活性、MDA含量、扩张皮瓣包膜厚度、包膜胶原含量和扩张皮瓣即时回缩率。用免疫组化的方法检测未扩张皮瓣中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和扩张皮瓣中α-SMA的表达情况。结果:(1)血肿组术后皮瓣MPO活性和ICAM-1的表达量均高于对照组(P<0.01),阿加曲班组皮瓣MPO活性和ICAM-1的表达量均低于血肿组(P<0.01);(2)血肿组术后72h和120h皮瓣MDA含量均高于对照组(P<0.01),阿加曲班组术后72h和120h皮瓣MDA含量低于血肿组(P<0.05)(3)血肿组扩张皮瓣包膜厚度、包膜胶原含量、扩张皮瓣中α-SMA的表达量、扩张皮瓣即时回缩率均高于对照组(P<0.05),阿加曲班组的这些指标均低于血肿组(P<0.05)。结论:1.扩张器植入术后形成的非张力性血肿能使未扩张皮瓣脂质过氧化反应和炎症反应增强。局部应用去铁胺能减轻血肿造成的脂质过氧化反应,去铁胺的这种作用主要是通过降低皮瓣中的铁含量而实现的。局部应用阿加曲班能减轻血肿造成的脂质过氧化反应和炎症反应,阿加曲班的这种作用是通过抑制血肿中的凝血酶而实现的。2.凝血酶能诱导成纤维细胞增殖、胶原分泌量增加,能刺激成纤维细胞表达α-SMA,使成纤维细胞转变为肌成纤维细胞。阿加曲班能抑制凝血酶的这种作用。3.非张力性血肿能使扩张皮瓣的纤维包膜增厚、包膜胶原含量增加、α-SMA表达增多、扩张皮瓣即时回缩率增加。局部应用去铁胺不能减轻血肿的这种作用。局部应用阿加曲班能减轻血肿的这种作用,阿加曲班的这种作用是通过抑制血肿中的凝血酶而实现的。