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猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病,是能造成养猪行业重大损失的一种烈性疾病。目前规模化养殖场采用猪瘟兔化弱毒疫苗C株进行全群普免,虽然C株疫苗对猪瘟的防控发挥了巨大作用,但是近年来全国各地陆续报道了部分规模化养殖场免疫疫苗后仍然爆发猪瘟的临床案例。本文针对规模化猪场进入休药期后,生猪出现咳嗽、气喘、呼吸困难等临床症状,深入屠宰场采集不同来源的三组96份猪肺脏,采用PCR进行病原微生物检测,结果表明,肺部病原微生物为猪圆环病毒2型(感染率68.75%),猪肺炎支原体(感染率为36.46%)、猪链球菌2型(感染率为11.46%)为主,其次是猪瘟病毒(感染率3.13%)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(感染率2.08%)。采用28分制计分标准对三个组的肺脏进行计分,发现三组肺脏的平均分从1.0～2.2不等,说明屠宰场的猪肺脏存在一定程度的病原微生物感染。随机选取3组肺脏标本经制作切片、染色以及显微镜检查,观察肺组织的病理变化。结果显示,各组肺部都有炎性细胞浸润,肺泡壁増厚至出血性巩固等病变。与临床症状、PCR检测和肺脏计分结果相符。2016-2017年,收集了山东省不同地区12个大型农场的103例临床疑似猪瘟病毒感染样本。共分离并检测到11只猪朊病毒,均属于2.1 d亚组。序列分析发现在E2蛋白的主要中和抗原区(B/C)存在15个高频变异位点(3,20,31,49,90,108,156,165,174,192,212,235,253,270,336)以及2个氨基酸保守位点(56,182)。血清中和试验结果表明,不同基因型猪瘟病毒的血清中和抗体滴度均有显著差异。针对HCLV疫苗株的HCLV株(1.1亚型)免疫血清的中和滴度为256。而对SDWF-2016株(2.1 d亚型)的中和效价仅为16;针对SDWF-2016菌株的SDWF-2016免疫血清的中和滴度为128,而HCLV菌株的中和滴度仅为16。该结果表明,传统的C株疫苗(即HCLV疫苗)不能对新出现的2.1 d亚型菌株提供全面保护,为近年来部分猪场虽然广泛免疫疫苗但仍有CSF疫情发生提供了合理解释。2016年从山东某爆发猪瘟的养猪场分离获得SDWF-2016株(2.1d亚型),构建原核系统表达其E2蛋白。选择6只健康的35日龄仔猪,随机分为两组:对照组颈部肌肉接种2 mL DMEM,免疫组颈部肌肉接种乳化制备的2 mL E2蛋白疫苗,免疫14天后,将卟啉的强毒株用于攻击,并且且在攻击后15天对所有存活的猪进行尸检。观察每个组织器官损伤并测定血清样品的ELISA抗体和中和抗体。结果显示,对照组ELISA抗体阳性率为0,中和抗体平均值为10。免疫组ELISA抗体阳性率为100%,中和抗体滴度≥1448。动物免疫激发试验结果表明,经典猪瘟病毒2.1d亚型的E2蛋白具有良好的免疫原性。能够有效地保护猪瘟病毒石门强毒株的攻毒,将来可以作为潜在的亚单位疫苗进行开发。