【摘 要】
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次番木鳖昔合成酶(Secologanin synthase, SLS)是喜树碱合成过程中一个重要的限速酶。我们实验室在前期工作中已经在喜树中克隆出一个与SLS基因相似的基因,将其称之为sls-lik
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次番木鳖昔合成酶(Secologanin synthase, SLS)是喜树碱合成过程中一个重要的限速酶。我们实验室在前期工作中已经在喜树中克隆出一个与SLS基因相似的基因,将其称之为sls-like基因。本实验目的是将基因sls-like重组到pET-28a(+)的原核表达载体上,并构建保留His·Tag的表达载体。在宿主细胞E.coli BL21 (DE3)中表达,然后使用高效液相色谱和质谱对表达产物进行分析。结果表明了我们构建的重组质粒pET-28a-sls-like在宿主细胞E.coli BL21(DE3)中已经成功地表达。并确定了在28℃、添加IPTG诱导剂0.6 mM的条件下培养3个小时,目的蛋白质呈现过量表达,但是表现为不可溶性的蛋白。利用保留His-Tag技术,采用镍金属螯合(Ni-NAT)层析进行了目的蛋白质的分离纯化,最后用高效液相色谱和质谱联用技术进一步证明了目的基因的表达情况。此外,通过蛋白序列分析,与SLS相似度达62.8%,与我们实验室前期工作预测的结果相一致。
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