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目的真菌性角膜炎是一种严重的致盲眼病,然而角膜胶原交联术(Corneal Collagen Corss-linking,CXL)对真菌性角膜炎的疗效仍有争议。我们分别建立了体内和体外两种模型,以便更好的评估角膜胶原交联对真菌性角膜炎的治疗作用。材料与方法体外实验,对培养皿内的腐皮镰刀菌进行不同时间UVA照射,动态观察各组培养皿内的真菌活力。马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)倾注平皿,腐皮镰刀菌菌株接种后,置于25℃的真菌培养箱孵育72h。用无菌生理盐水配制孢子悬液,并调整菌悬液浓度至10^6CFU/ml。用加样枪吸出200ul孢子悬液,在培养皿上涂布均匀,置于25℃的真菌培养箱孵育。24h后将培养皿取出,随机分为四组:对照组(不进行任何操作)、角膜胶原交联组(核黄素/紫外线)、核黄素组、紫外线组。其中,角膜胶原交联组和紫外线组各自分为5个亚组,分别进行2min、5min、l0min、20min、30min等不同时间的照射,动态观察各组真菌活力。培养皿内取真菌灰度值一致,直径6mm大小培养基区域。在角膜胶原交联组和核黄素组滴加0.1%核黄素溶液20ul,避光保存30min。仅对角膜胶原交联组和紫外线组进行角膜胶原交联照射,光斑直径为6mm,紫外线强度45mW/cm^2,照射距离(距真菌高度)为5cm,其余地方避光保存。照射完成后,将各组培养皿置于25℃真菌培养箱,48h后用数码相机获取图像并用Image J软件分析各组真菌灰度值,求真菌活力。体内实验,取用150只雄性C57BL/6小鼠,6-8周龄,角膜十字划线法进行腐皮镰孢菌角膜炎模型制作。随后将小鼠任意分为三组:A组非交联(对照组);B组角膜胶原交联2min治疗组;C组角膜胶原交联3min治疗组,造模成功后3d,用裂隙灯显微镜对小鼠角膜进行评分并计数角膜组织的载菌量。3组小鼠于造模后进行裂隙灯显微镜下术眼角膜炎症动态评分及眼前段数码照相。造模成功后第l0d,观察角膜组织各项炎症转归后,行HE染色病理学检查及炎症细胞百分比计数。结果体外实验,角膜胶原交联30min照射组的真菌活力较对照组、紫外线组、核黄素组显著降低,且差异有统计学意义(P<0.01)。体内实验,角膜胶原交联2min治疗组和角膜胶原交联3min治疗组的疗效均好于非治疗组。表现为交联组小鼠角膜载菌量最低,且各组角膜载菌量的总体差异有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析检验,交联组小鼠角膜的载菌量与角膜炎症评分呈明显正相关。治疗后小鼠角膜炎症逐渐减轻,各项转归有所好转,表现为角膜病变、角膜混浊、新生血管和溃疡深度均明显低于非交联组(P<0.05,P=0.001,P=0.001,P=0.034和P=0.025),且角膜胶原交联3min治疗炎症表现明显少于角膜胶原交联2min治疗组。组织学观察显示,角膜胶原交联2min治疗组的中性粒细胞占基质细胞总数的百分比为43.67%、角膜胶原交联3min治疗组中性粒细胞的百分比为13.29%,角膜胶原纤维的破坏程度有所减少、炎症细胞浸润程度减轻且明显低于非治疗组。治疗组中性粒细胞百分比为72.65%。结论角膜胶原交联可以有效杀灭真菌病原体、减轻真菌性角膜炎的炎症反应、显著减少角膜并发症,且随治疗时间的延长疗效有所增加。