静压力对髁突软骨转化生长因子β<,1>表达影响的体外研究

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[目的] 建立髁突软骨体外器官培养模型,观察体外器官培养的髁突软骨在受到一定时间的静压力作用后,转化生长因子β1(TGF-β1)表达的变化;在软骨器官水平上观察静压力对髁突软骨细胞表达TGF-β1的影响。 [材料和方法](1)选用新生SD大鼠的髁突软骨作为器官培养材料,采用格栅式器官培养法,建立体外髁突软骨器官培养模型。分别在取材培养后1-6天收集样本,4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片,行HE染色。(2)解剖、培养10个髁突软骨,培养到24小时,应用静压力加载装置对其中5个(实验组)加载强度为10kpa的持续静压力1小时。加力完成后两组同时收集样本。进行HE染色观察软骨生长状态。用免疫组化技术检测实验组和对照组髁突软骨TGF-β1表达,用彩色病理图像分析仪检测髁突软骨各层TGF-β1表达的强度。对照组除软骨不加力外,其它培养条件与实验组相同。 [结果] 髁突软骨体外器官培养:切片显示在体外器官培养过程中,培养早期(4天以内),髁突软骨层次分明,细胞结构完整的,形态良好。随着培养时间延长至5天,细胞表层局部细胞出现空腔,周围的细胞早期结构清晰完整,随后出现崩解。 静压力对髁突软骨的影响:对实验组和对照组的髁突软骨分别进行HE染色及TGF-β1免疫组化染色。HE染色切片观察到两组髁突软骨的细胞层次结构无明显差异;TGF-β1免疫组化染色切片显示,实验组的髁突软骨各层细胞TGF-β1表达均增强(P<0.05)。其中成软骨细胞层改变最明显(P<0.01)。 [结论] 1.应用格栅式器官培养系统在6天可成功培养髁突软骨。培养到1~4天内,髁突软骨细胞层次清晰,结构完整,表明髁突软骨生活状态良好。5天后,髁突昆明医学院硕士研究生论文软骨表层部分出现空腔,既而发生细胞崩溃。培养至24小时的裸突软骨结构保持比较完好,故选择此时进行加力实验。 2.培养到·24小时的裸突软骨用强度为loKPa(100岁clnZ)的静压力作用一小时,与没有受力的裸突软骨相比,裸突软骨各层细胞TGF一p;表达增强,其中成软骨细胞层表达增强最为明显。其机理可能是在压力作用促进了软骨细胞的代谢活动,细胞通过加强增殖和分化产生适应性改变。
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