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幽门螺杆菌(Hp)是一种世界性流行的革兰氏阴性细菌,Hp的人群感染率约20.80%,是十二指肠溃疡和慢性活动性胃炎的主要致病因素之一,与胃癌的发生有一定的关系。由此吸引了众多学者对Hp的广泛深入的研究,但仍有许多问题有待解决,如口腔是不是Hp的寄居环境之一;为何Hp感染后,临床结局和转归有很大差异;如何判断Hp根治性治疗失败后是属再感染抑或复燃等。故本研究同时采用16sRNA和vacA为模板设计的引物,对唾液和胃粘膜中的Hp直接进行扩增,并与常规Hp检测法--快速尿素酶(RUT)和组织学银染法进行比较,观察其特异性和灵敏度。由于采用了一对以vacA基因的特殊部位为模板设计的引物,可将Hp扩增出259bp、286bp两种产物,而每一种Hp只能扩增出一种片段,前者来源于可表达VacA蛋白的60190菌株的信号序列,称为vacA1;后者来源于不表达VacA蛋白的Tx30a菌株的信号序列,称为vacA2。同时,对Hp的vacA PCR产物进行单链构象多态性分析(PCR-SSCP),期望用Hp的毒力因子(vacA),将不同Hp区分开来,寻找与临床某一疾病相关的细菌DNA单链构象。另外,根据PCR-SSCP分型结果,对3例DU的PCR产物行基因序列分析,观察是否有某处或某几处vacA基因有点突变或缺失及其与临床疾病的关系。并利用Southern杂交来证实PCR产物的特异性。此外,利用蛋白印迹法(western blot)来判断Hp的vacA和cagA基因型与表现型间的关系,以期建立一种简单、实用的临床诊断法来初步判断Hp的毒力强弱。最后,采用原位凋亡检测法和电镜分析,对Hp感染的胃十二指肠疾病进行研究,来探讨细胞凋亡与Hp感染在胃十二指肠疾病中的意义。本文结果及意义如下: 1.本文利用16sRNA和vacA为模板设计的引物对149例Hp阳性患者的胃粘膜直接行PCR检测,其特异性和灵敏度均与临床常规的Hp诊断法