【摘 要】
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本课题以广地龙为原料,致力于开发出一条易于放大为规模化生产的蚓纤维蛋白溶酶提纯工艺路线,并对得到的产品进行了进一步纯化,然后进行了性质研究.首先考察了广地龙中蚓纤维
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本课题以广地龙为原料,致力于开发出一条易于放大为规模化生产的蚓纤维蛋白溶酶提纯工艺路线,并对得到的产品进行了进一步纯化,然后进行了性质研究.首先考察了广地龙中蚓纤维蛋白溶酶的水提取工艺,分别考察了提取时间,提取次数和溶剂体积三个因素对提取效果的影响,并进行了盐析浓度段的考察.然后考察了D4020、D3520等12种树脂应用于蚓纤维蛋白溶酶提纯的可能性.对D4020树脂的吸附条件进行了优化,并计算了D4020树脂的提纯效果,认为酶的总得率为74.99%,与水提取液相比纯度提高15.14倍,最终产品纤维蛋白活性达29.45 IU/mg固性物.对提纯产品进行了进一步的纯化,截取了6~20 kD分子量段的物质.经检验,该物质仍具有纤溶活性,且纯度较高,达电泳纯.对其进行了性质研究,认为该酶在pH3.0~9.0稳定;最适反应pH7.4;低于60℃时稳定;最适反应温度55~60℃;含糖量为1.19%;Vmax=134.95BAEE效价,Km=0.1687 mg/mL.
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