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猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of pigs,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)引起的高度接触性传染病之一,该病显著的临床症状为严重腹泻、呕吐和脱水等。不同年龄的猪均易感,尤其对新生仔猪具有高度致死性,其中两周龄以内的仔猪致死率最高,可达100%。5周龄以上仔猪死亡率开始降低,成年猪几乎没有死亡,但有很多不良后果,如饲料报酬率和生产性能下降等,给养猪业造成了巨大的经济损失。该病尚无有效的治疗措施,因此,科学的疫苗免疫在临床防控中被证明是最为有效的措施。目前弱毒苗存在毒力返强等风险;灭活疫苗虽然安全性好,却存在产生抗体速度较慢、诱导机体产生细胞免疫较弱的缺点。因此本试验针对灭活疫苗的佐剂展开了相关的研究。本试验主要研究了不同佐剂TGEV灭活疫苗接种小鼠后的免疫效果,并初步探讨了免疫相关的miRNA的表达情况,不仅为安全、高效疫苗佐剂的筛选提供更大的可能性,而且为临床上对该病的防治提供一定的试验依据。具体研究内容如下:1、首先将猪传染性胃肠炎病毒HN-2012株用0.2%的甲醛灭活24 h,分别制备了 3种不同佐剂灭活疫苗。纳米硅佐剂灭活疫苗,按照火活的病毒液与纳米硅佐剂1:2的比例分别制备粒径为70 nm和150 nm的纳米硅佐剂灭活疫苗。油乳剂疫苗,将灭活的病毒液与白油佐剂同样按照1:2的比例制成。经检验,制备的上述3种灭活疫苗的理化性状和无菌性均合格,且对乳鼠安全性良好。2、将制备的3种灭活疫苗免疫小鼠,并分别与TGEV无佐剂对照和市售 TGEV铝胶佐剂灭活疫苗的免疫效果作对比。在免疫后0、1、2、3、4、5、6、8、10周,分别用EL1SA方法和流式细胞仪检测免疫小鼠的体液免疫及细胞免疫水平;用MTT比色法检测淋巴细胞的增殖情况。结果显示:这5种疫苗均能诱导小鼠产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答,70 nm组、150 nm组和TGEV油乳剂组均能诱导小鼠产生较高的体液免疫水平:70 nm组较其它试验组更能诱导小鼠产生较高的细胞免疫水平;各组的T淋巴细胞增殖除了150 nm组和油乳剂组与生理盐水组差异显著,其余各组差异均不显著;各组的B淋巴细胞增殖也无显著性差异。3、对于不同佐剂灭活疫苗组,分别对小鼠免疫相关的miR-21、miR-27、miR-30、miR-146、miR-150、miR-155和miR-181的表达水平进行了初步探讨。在分别免疫0 h、12 h、72 h后,应用荧光定量PCR方法检测与小鼠免疫相关的miRNA的相对表达量。结果显示,在12 h、72 h后,各免疫相关基因的相对表达量均有下调情况,但下调情况不尽一致,其中miRNA 相对表达量均较低的是 miR-181。在 12h 时,70 nm 组的 miR-27、miR-146、miR-155基因的相对表达量均高于其它组:而150 nm组的miR-30、miR-150、miR-181基因的相对表达量均高于其它试验组。在72 h时,TGEV油乳剂组的miRNA的相对表达量较高,且均高于其它佐剂灭活疫苗组。