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黑木耳(Auricularia heimuer)是世界上产量仅次于双胞蘑菇、香菇及糙皮侧耳的第四大栽培食用菌,在我国食用菌产业体系中占有重要的地位。本研究利用来源于全国各地不同地区的127份黑木耳栽培菌株和野生菌株为材料,运用SSR分子标记方法构建黑木耳种质资源分子身份证。在114对SSR引物中筛选出11对引物对收集来的种质资源进行扩增,并对数据结果进行分析,这为食用菌种质资源进行鉴定和保护提供了依据。本实验研究主要从以下几个方面展开研究:(1)从全国各地收集黑木耳菌株,分离纯化后培养得到栽培菌种107份,野生菌种20份,进行菌种入库处理。提取供试菌株基因组DNA,并以其为模板,使用通用引物ITS1/ITS4扩增出目的DNA片段,将PCR产物直接测序结果与NCBI数据库中相关序列进行比对,BLAST鉴定结果表明,引物ITS1/ITS4能够准确的进行黑木耳种属关系的鉴定,并绘制系统发育树,确定107份栽培菌株均属于黑木耳菌株,20份野生菌株中有19份是黑木耳菌株,1份是毛木耳菌株,为建立全球食用菌DNA条形码数据库奠定了基础。(2)拮抗实验是鉴定菌株之间遗传差异的传统方法。通过观察,我们可以清晰的看到Au1至Au13之间并没有明显的拮抗产生,Au89和Au127,Au112和Au113,Au22和Au82,Au43和Au85,Au46和Au88之间也并没有拮抗线的产生,我们可以初步断定这些菌株之间,亲缘关系较近或者归属于同一品种不同商品名现象。其余菌株均有明显或较明显的拮抗线产生,通过拮抗试验我们将126份菌株进行了大致的分类,为分子生物学结论加以佐证。(3)利用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)进行SSR(Simple Sequence Repeat)引物的筛选,从114对引物筛选出48对具有多态性的引物,其PIC值在0.103-0.908之间。从中选取11对特异性较高的引物最为构建分子身份证的核心引物,PIC值在0.564-0.908之间,并根据实验结果对PCR反应体系进行优化,得到了这11对引物最适退火温度,应用NTSYS软件进行数据分析,根据UPGMA聚类分析表明,126份菌株遗传相似性系数为0.44-1.0,分析结果显示来源于不同地区的黑木耳聚类在一起,体现出黑木耳菌株之间很可能来源于共同的原始祖先,或者各品种之间有较近的亲缘关系。黑木耳品种引种的严重化趋势,导致来源于东北和湖北的品种之间错综聚类,在相似系数为0.55处,将部分野生菌株与栽培菌株明显分开,表明菌株之间亲缘关系相对较远,为今后的育种工作带来了更多的参考依据。(4)分子身份证是作物品种数字化的DNA指纹,本实验利用筛选得到的11对特异性引物对收集来的所有供试菌株进行黑木耳分子身份证的构建,我们通过构建黑木耳种质资源分子身份证的方式,对其菌种信息建立了一个更精确的数据库,二维码已经广泛的应用于产品标识,我们还将相应菌株的分子身份证及其他信息转化成二维码形式,通过手机或者其他机器扫描后可以快速识别。我们将DNA条形码序列、相应物种拉丁名、相应分子身份证、菌株生长经纬度、菌株适宜生长环境制作成二维码图片,有利于我们今后进行种质资源的鉴定和保护,为建立食用菌DNA条形码鉴定系统提供了参考依据,对于种质资源的鉴定提供了一个更好更便捷的方式和途径。