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鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的新成员。DuCV感染可导致鸭子羽毛凌乱、生长迟缓、体重减轻等症状。本研究建立了核酸探针检测鸭圆环病毒的方法,并用此方法对鸭圆环病毒的流行病学进行了调查,同时借助杆状病毒-昆虫细胞表达系统对DuCV Cap基因进行表达并对其核定位信号进行了研究。以DuCV传染性克隆为模板制备了检测DuCV的核酸探针,研究表明该探针特异性强,只能与DuCV核酸发生特异性杂交,而与对照的鸭病毒性肝炎Ⅰ型(DHV-1)病毒、鸭瘟病毒(DPV )的核酸杂交反应为阴性;灵敏度高,最低检出量为5pg;使用方便,适合于批量检测。应用该探针对从山东、江苏、四川等地采集的196只鸭病料,共1025份脏器的组织DNA进行检测,结果个体阳性率为33.2%,在各脏器中法氏囊、肝脏、脾脏的DuCV检出率较高,检出率分别为52.3%、49.2%、38.5%。通过PCR方法扩增完整的Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBac TMHTB杆状病毒载体中,将筛选的阳性重组载体pF-CP,转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞中,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Westernblot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,本研究成功构建了表达鸭圆环病毒Cap蛋白的重组杆状病毒,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性。DuCV FJ0601株Cap蛋白N端存在36个碱性氨基酸(AA),通过软件PROSITE分析发现此区域存在两个二分裂核定位信号(Bipartite nuclear localization signal),分别位于Cap蛋白N端的第2~17位AA和第21~36位AA。为进一步研究鸭圆环病毒Cap蛋白的生物学功能,我们构建了一系列Cap相关的融合表达质粒,对其核定位信号区进行了相关研究。首先将强型绿色荧光蛋白(EGFP)插入pFastBacTM HTB载体,构建pF-EGFP重组质粒,然后构建pF-EGFP-CP、pF-EGFP-CP-Δ17N(N端缺失2-17个AA)和pF-EGFP-CP-Δ36N(N端缺失2-36个AA)三个重组质粒分别转染Sf9昆虫细胞。结果显示pF-EGFP-CP、pF-EGFP-CP-Δ17N蛋白定位在细胞核中,而pF-EGFP-CP-Δ36N蛋白定位在胞质中,这一结果证实了PROSITE软件预测的DuCV Cap中的核定位信号为功能性核定位信号。