【摘 要】
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目的从转染Her-2/neu基因的T6-17细胞上清中纯化p185蛋白作为阳性抗原对照,利用生物素-亲和素酶联免疫法(Biotin-Avidin ELISA,BA-ELISA法)检测乳腺癌患者血清中p185蛋白,探
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目的从转染Her-2/neu基因的T6-17细胞上清中纯化p185蛋白作为阳性抗原对照,利用生物素-亲和素酶联免疫法(Biotin-Avidin ELISA,BA-ELISA法)检测乳腺癌患者血清中p185蛋白,探讨血清p185蛋白在乳腺癌诊断中的意义。方法采用溴化氰活化的Sepharose 4B为基质,通过交联A18 mAb,用亲和层析的技术纯化p185蛋白。将收集的T6-17细胞上清循环过亲和层析柱,经醋酸溶液解离与抗体结合的p185蛋白,收集到蛋白洗脱峰,浓缩后用ELISA检测p185的免疫反应性,并经SDS-PAGE和Western blot进一步鉴定。利用自备的生物素化Her-2/neu单克隆抗体,并利用亲和层析法从T6-17细胞培养上清中纯化的p185蛋白作为阳性对照,采用BA-ELISA方法对乳腺癌和正常对照血清进行p185蛋白检测,同时对乳腺癌患者组织进行p185蛋白免疫组化染色,并对实验结果进行统计学分析。结果从转基因细胞上清中成功获取p185肿瘤抗原;用BA-ELISA方法检测了122例乳腺癌患者血清,血清p185阳性数为39例,检测了110例正常人血清,血清p185阳性数为0例;122例乳腺癌患者中免疫组化p185阳性数为43例,其中血清p185升高38例。结论初步建立了乳腺癌患者血清中p185蛋白的BA-ELISA检测方法,结果显示患者血清中p185蛋白对乳腺癌具有重要的诊断意义,血清p185蛋白和组织p185蛋白呈高度相关。
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