三种真菌毒素蛋白质微阵列检测方法的初步研究以及抗四环素多克隆抗体的制备

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:junyuan__zhang
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
1真菌毒素(Mycotoxin)是真菌产生的次级代谢产物,通常存在于霉变的谷物中,一旦通过食物链进入人体后,将可能造成致畸、致突变和致癌等严重危害,因此在全球食品安全问题中备受关注。目前,真菌毒素的检测一般采用高效液相色谱法(HPLC)或酶联免疫吸附法(ELISA),前者检测灵敏度高,但样品前处理烦琐、操作复杂、时间长,所需设备较昂贵;后者操作简便、快速,但每次只能完成一种真菌毒素的检测。因此,具有高通量优点的蛋白质微阵列技术将是真菌毒素多残留快速检测的发展趋势。本研究在前期已制备出玉米赤霉烯酮(Zearelenone,ZEN)、黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)三种真菌毒素人工抗原及其相应单克隆抗体的基础上,采用间接竞争的检测原理,以荧光作为检测信号,对ZEN、AFB1和DON蛋白质微阵列检测方法进行了初步研究。结果如下:(1)ZEN、AFB1和DON蛋白质微阵列单指标检测的研究采用正交实验分别确定了ZEN、AFB1和DON人工抗原的最佳点阵浓度为40μg/mL、40μg/mL和20μg/mL,对人工抗原固定条件、封闭方式和二抗浓度进行了单因素优化,确定了4℃过夜固定、37℃20min封闭和2μg/mL羊抗鼠IgG-CY3二抗为三个单因素实验的最佳条件,进而以ZEN、AFB1和DON标品分别进行间接竞争抑制实验,绘制了ZEN、AFB1和DON蛋白质微阵列单指标检测的标准曲线,灵敏度(IC50)分别为2.1ng/mL、0.29ng/mL和86.8ng/mL,线性检测范围分别为0.5-10ng/mL、0.125-1.0ng/mL和50-400ng/mL。(2)同时检测ZEN、AFB1和DON蛋白质微阵列的初步研究在研究结果(1)的基础上,进行了同时检测ZEN、AFB1和DON蛋白质微阵列的初步研究,确定了羊抗鼠IgG-CY3二抗的最佳浓度为4μg/mL,以ZEN、AFB1和DON标准品同时进行间接竞争抑制实验,绘制了同时检测ZEN、AFB1和DON蛋白质微阵列的标准曲线,灵敏度(IC50)分别为1.3ng/mL、0.154ng/mL和70.4ng/mL,线性检测范围分别为0.75-6ng/mL、0.125-0.6ng/mL和25-200ng/mL,均满足我国规定的最高允许限量的检测要求。2四环素(Tetracycline,TC)是由链霉菌产生的一种碱性广谱抗生素,因价格低廉,抗菌效果较好,在畜禽类养殖业中广泛使用,不可避免将造成动物体内四环素的残留,即使残留量很小,但长期食用,对人体健康仍具有很大的潜在危害。因此,对四环素残留进行及时检测是预防和控制其危害的有效手段。本研究进行了抗四环素多克隆抗体的制备研究,旨在建立四环素的免疫学检测方法。结果如下:采用甲醛一步连接法(Mannich反应)分别制备了四环素偶联阳离子化牛血清白蛋白(TC-cBSA)人工抗原和四环素偶联卵清白蛋白(TC-OVA)人工抗原。经紫外图谱鉴定后,以TC-cBSA为免疫原对三只BALB/C雌性小鼠进行背部皮内免疫,经三次加强免疫后,以TC-OVA为检测抗原采用间接ELISA检测抗血清效价,并采用间接竞争ELISA检测抗血清特异性及交叉反应。竞争抑制曲线表明三只小鼠均产生了抗四环素的特异性抗体,其中2号小鼠抗血清效价最高,为1:32000,半量抑制浓度(IC50)为173.78ng/mL,该抗血清仅与土霉素存在44.7%的交叉反应率,与链霉素、氯霉素和阿莫西林的交叉反应率均小于<0.01%。
其他文献
“他山之石,可以攻玉。”出自《诗经·小雅·鹤鸣》。原意说的是,别的山头上的石头,可以用来琢磨玉器。后来人们多用来比喻通过学习借鉴他人的经验和做法,弥补自己的缺陷和不
当前,双语教学已经成为高等教育改革的重要创新点。本文深入分析高校体育双语教学的特点,提出在体育教学各环节运用双语教学应遵循的基本原则,并指明当前应着力解决的“思维
“八五”期间,科技攻关项目为22项,其中重点为6项。 1.豫西“三软”不稳定煤层开采技术研究 包括各种技术方案的论证和对比,开采工艺和方法研究,支架选型或新架型设计,顶板
手机的迅速普及催生了短信文化,短信文化是把双刃剑,既给大学生的生活带来了种种好处和便利,同时也对大学生的文明素养产生了不可低估的负面影响,德育工作者要对“拇指文化”
美国瓦格纳(Wagner)采矿设备公司推出一种新式中等尺寸的ST-6L Scooptram铲运机。其铲斗容积为6码~3(4.8m~3),瓦格纳公司声称,它是当今最矮的铲运机。除了灯以外,轮胎是该机
认识物体最常见、最基本的方法是观察和实验,就是说“观察和实验”是人类认识自然的基本方法和途径,也是学科教学的重要特征.“观察--思考,实验--分析”,这是学生认知的规律,
教师引导学生诵读国学经典作品不仅能够拓宽学生的学习知识面,同时还能在一定程度上提升学生的文学素养。将语文课堂实际教学与国学经典互相融合渗透,能够提升个人的语文综合能力和素养。  一、生字练习中的国学  汉字可以说是华夏文明的最重要标志之一。汉字又被称为方块字,是几千年来汉字书写规范的传统结论。体会中华汉字之美和内涵,是领略和传承国学经典文化的基础。在对学生进行日常文字教学(识字、写字等)的同时引导
期刊
在小学生的作文中,最常见的问题是“千篇一律”,同一个题目写出来的文章大同小异,这反映出学生在写作构思中习惯遵循传统思维。古人云:“文贵出新,文贵创新。”教师在指导写作的过程中,要启发学生“见人所未见,發人所未发”,追求立意和构思的新颖性和独创性。引导学生打破常规思维,变换思考的角度,获得独到的见解,于平淡中见奇,写出“新”作文。  一、逆向求异,立意新颖  文好题一半。一个富有新意的标题往往能在第
期刊
服饰是人类物质文化和精神文明的重要标志,它的形成和演变过程,是人类社会文明不断积累、发展和进步的体现.随着现代服装文化的发展,吸收民族服饰文化的精华元素将成为设计者
1984~1987年间,格伦德矿建立了一个地质数据库。利用适合于矿床的地质统计计算程序和一台个人计算机(PC机)来提高回采计划与管理以及矿石储量计算的灵活性。由于矿床条件特别