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慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是威胁人类健康的主要感染性疾病，全球约有400万患者。目前批准用于治疗慢性乙型肝炎病毒(CHB)感染的抗病毒药物包括免疫调节剂（干扰素-α和聚乙二醇干扰素-α）和核苷类药物（拉米夫定，阿德福韦酯，泰诺福韦和恩替卡韦）。干扰素的低应答率和毒副作用以及核苷类药物的高耐药突变率等问题限制了它们对乙型病毒性肝炎治疗的临床应用。研发强有力的新型非核苷类小分子抗乙型肝炎病毒药物具有迫切的临床要求。因此，HBV聚合酶以外的潜在的抗HBV药物靶点，如病毒RNA的转录因子和核壳体组装以及包膜蛋白修饰等，已经被广泛的研究。鉴于HBV核心蛋白(HBcAg)的高度保守性及其组成的核壳体是HBV基因组合成的唯一场所，干扰核壳体的装配过程成为抗HBV药物研究得重要靶点之一。 研究天然产物为药物研发提供了新骨架和新思路，天然产物来源的化合物是抗病毒药物的主要来源。我们研究确定的非核苷类小分子抗HBV复制的候选新药异噻氟定（Isothiafludine，NZ-4）具有独特的来源于海洋天然产物LeucamideA的2，4-甲基噁唑-噻唑双杂串联结构单元。我们发现NZ-4能显著地抑制HepG2.2.15细胞培养上清和细胞质中的HBV DNA复制水平，并能有效地抑制核苷类抗HBV药物耐药突变株的HBV DNA复制水平。NZ-4与核苷类抗HBV药物拉米夫定联合用药具有协同增效作用。此外，与核苷类抗HBV药物不同，NZ-4不影响内源性聚合酶的活性，表明病毒复制不是NZ-4的直接的靶点。同时，NZ-4在鸭乙型肝炎病毒感染动物模型和土拨鼠肝炎病毒感染动物模型上也表现出了优异的抗病毒复制效果。 抗HBV机制研究表明，尽管NZ-4不影响HepG2.2.15细胞中HBV pgRNA和核壳体水平，但能诱导产生一类不含病毒核酸的空载核壳体。进一步的实验证明， HBV pgRNA包装失败可能是NZ-4抑制HBV DNA复制的主要原因。NZ-4可通过干扰pgRNA/Pol与核心蛋白二聚体的结合导致包装进核壳体的pgRNA减少，并且NZ-4的这一作用与病毒聚合酶结构和功能的完整性无关。 在转染单独表达HBV核心蛋白质粒的Huh7细胞实验体系中可以产生不含HBV RNAs的空载核壳体。NZ-4能诱导全长的核心蛋白Cp185异常组装，但不诱导C末端(CTD)完全删除的核心蛋白Cp140组装成异常核壳体。进一步的研究证实了HBV核心蛋白C末端第一精氨酸富集区的第150-152位精氨酸是NZ-4发挥作用的靶点，从而证实NZ-4诱导HBV核心蛋白异常组装的作用与病毒pgRNA无关。由此，我们证明了NZ-4的作用机制是:通过与病毒核心蛋白的非特异性的结合，NZ-4占据了核心蛋白C末端上的pgRNA/Pol结合区，即第一精氨酸富集区，导致了不含病毒基因组的空载核壳体的形成;同时明确了这种错误组装的空载核壳体的浮密度略小于正常核壳体，可以被病毒外膜蛋白所识别，并被包膜后分泌出细胞。这些新产生的空载HBV颗粒是缺乏感染宿主细胞能力的，无法进行新的感染和病毒的复制。 综上所述，NZ-4作为一个新型非核苷类小分子抗HBV候选新药，已完成新药临床前研究，并进入新药Ⅰ期临床研究阶段。NZ-4不同于其他抗HBV化合物，是第一个作用于HBV核心蛋白C末端第一精氨酸富集区的抗HBV活性化合物，能诱导产生不含HBV基因组的空载病毒颗粒。鉴于NZ-4独特的作用机制，其极有可能会成为一类新型抗HBV药物，并可与其他抗HBV药物联合应用，为难愈性乙型病毒性肝炎的治疗提供更多的选择。