论文部分内容阅读
目的:(1)评价艾芬地尔对强迫游泳模型小鼠抗抑郁作用效果。(2)生物样品(SD大鼠血浆)中艾芬地尔定量分析方法的建立完善(3)按半衰期重复多次给药后,考察艾芬地尔在大鼠体内达稳态的过程及稳态后药代动力学的特征。方法:使用小鼠行为绝望模型对艾芬地尔抗抑郁作用进行研究。(1)艾芬地尔抗抑郁作用起效时间和持续时间试验150昆明小鼠随机分为15组,每组10只,其中实验组(酒石酸艾芬地尔1mg/kg)、空白对照组(0.9%氯化钠注射液)、阳性对照组(氯胺酮2mg/kg),分别在腹腔注射给药后30min、60min、120min、240min、300min进行强迫游泳试验;(2)艾芬地尔抗抑郁作用量效关系试验100只昆明小鼠随机分为10组,每组10只,其中实验组(酒石酸艾芬地尔0.2mg/kg、1mg/kg、5mg/kg),阳性对照组(氯胺酮 2mg/kg),空白对照组(0.9%氯化钠注射液),分别于腹腔注射后120min、240min进行强迫游泳试验;(3)反复给药后艾芬地尔抗抑郁效果评价60只昆明小鼠随机分为6组,每组10只,其中实验组(酒石酸艾芬地尔5mg/kg),空白对照组(0.9%氯化钠注射液),第1、2、3组分别连续给药2天、4天、6天,三组均在最后一天给药后240min进行强迫游泳试验。生物样品(SD大鼠血浆)中艾芬地尔的定量分析采用超高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)的方法。考察LC-MS/MS方法的特异性、准确度和精密度、线性和范围、冻融稳定性等,建立灵敏、可靠的LC-MS/MS的方法测定重复腹腔注射艾芬地尔5个周期后生物样品中艾芬地尔的浓度。生物样品(SD大鼠,SPF级,雌雄各半,180-200 g),反复给药5次,间隔时间为半衰期2.42h,于每次给药前采血及第五次腹腔注射后,按照下述时间开始采血:1Omin,25min,45min,75min,90min,1OOmin,120min,180min,240min,360min。生物血浆样品经过处理后,对其中艾芬地尔的浓度进行测定。使用专业的药代动力学软件DAS(Drugand Statisties softwaro 2.1),对艾芬地尔在大鼠体内的吸收处置过程进行分析,得到各种药物动力学参数,得到以平均血药浓度为纵轴(Y),以取血时间为横轴(X)的血药浓度-时间曲线图。结果:(1)由小鼠行为绝望模型可知,艾芬地尔可在120min内显著缩短强迫游泳小鼠累计不动时间,该作用可持续240min,其作用强度在1mg/kg~5mg/kg范围内与剂量呈正相关;反复多次给药后,其作用持续时间仍然为240min。(2)建立的LC-MS/MS法测定大鼠血浆中艾芬地尔的浓度,其色谱条件为C18分析柱(Waters,1.7μm,2.1×50mm);流动相:A(甲醇);B(5mmol乙酸胺),梯度洗脱;流速:0.3 mL/rmin;进样量:2 μL,分析时间6min。采用ESI离子源,正离子扫描模式,艾芬地尔最佳检测离子为326.2、内标酮康唑最佳检测离子为531.0;艾芬地尔和内标酮康唑的碰撞电压分别为44 V、42V;生物基质不影响药物浓度的测定,且峰形良好,无杂峰干扰,基线平稳,艾芬地尔和内标酮康唑保留时间分别为3.10 min、3.70 min,分析方法的线性范围为5~100ng/mL,最低定量下限为5ng/mL;日间、日内精密度(RSD)均小于15%,回收率大于85%,冻融三次后提取稳定,不影响生物样品的测定。结论:(1)艾芬地尔对强迫游泳模型小鼠具有明显的抗抑郁作用,反复多次给药后,其抗抑郁作用持续时间维持稳定。(2)在建立的LC-MS/MS条件下,能够速度更快、结果更准的测定反复腹腔注射艾芬地而后大鼠血浆内艾芬地尔的浓度。(3)艾芬地尔经腹腔反复注射后在大鼠体内的药动学模型为二室模型,半衰期为2.86h。