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该文通过常规的基因克隆技术,采用RT-PCR方法将大麦黄花叶病毒中国株系(BaYMV-C)RNA1 上四段共约4.5kb的基因片段进行了克隆,初步筛选到了CP基因的重组质粒,并对其进行好测序比较研究.同时对基因克隆操作中的有关步骤作了一定的探讨.该实验首先采用LiCl沉淀法从有明显感染了BaYMV病状的大麦叶片中提取出了总RNA,经过甲酰胺变性凝胶电泳检测和紫外分光光度计浓度测定之后,用AMV-RT反转录酶反转录为cDNA,其中包括了BaYMV RNA1和RNA2的cDNA.根据已报道的日本和德国BaYMV株系和RNA1的有关序列,设计合成了克隆5末端,nia、nib和cp四段基因的引物,通过PCR扩增,分别得到约0.9kb的5末端?0.8kb的NIa、1.7kb的NIb和1.1kb的CP,并将它们与载体质粒pUC18和pGEM-7zf进行了连接.目前已初步筛选到了CP基因的阳性重组子,并对插入片段进行全国序列测定分析.通过与日本株系比较,对照德国和英国株系比较的结果表明:它们之间核苷酸与推导的氨基酸序列的同源性分别为96.0%~98?0%和97.5%~99.7%.另外,初步讨论了不同株系间的亲缘关系以及大麦黄花叶病CP介导抗性的基因工程研究中的应用.该实验不仅为构建中国抗BaYMV转基因工程大麦的"复合抗性基因"提供了前提条件,而且还为BaYMV株系分析等病毒的分子生物学研究提供了实验依据.