论文部分内容阅读
宫颈癌是世界上第三大流行的妇科恶性肿瘤,估计每年有530000妇女发病以及275000妇女死于宫颈癌。滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell-surface antigens 2, TROP2)是一个36 kDa跨膜糖蛋白,是肿瘤相关的钙信号转换器基因家族一员。它最初在人滋养层细胞中发现,在大多数上皮性恶性肿瘤中过量表达而在正常组织中不表达或低表达。大量的证据已经表明TROP2在多种上皮性肿瘤中特异性过表达,可以通过加速细胞周期进程,导致恶性肿瘤的发生和侵袭,而且TROP2的过度表达与肿瘤进展和不良预后密切相关。Ki67(Antigen identified by monoclonal antibody细胞增殖抗原)是一种核抗原,与细胞的增殖相关,是目前检测细胞增殖活性比较准确可靠的标记物。目前国内关于TROP2、Ki67与宫颈病变关系的临床研究鲜有报道,本研究利用免疫组织化学(immunohistochemistry IHC)、实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative polymerase chain reaction RT-qPCR)、及蛋白质印迹(Western blotting)法检测TROP2、Ki67在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌组织中的表达,探讨其与宫颈病变临床病理的关系及二者的相关性。目的本实验通过检测人滋养细胞表面抗原2(TROP2)、Ki67在宫颈鳞癌(SCC)、宫颈上皮内瘤变(CIN)、正常宫颈上皮组织中的表达,分析其与临床病理因素的关系,同时探讨二者的相关性。方法采用免疫组化SP法检测TROP2、Ki67蛋白在22例正常宫颈、35例CINI、35例CINII、38例CINIII以及65例宫颈鳞癌组织中的表达情况,并结合临床病理因素进行分析；实时荧光定量PCR法检测20例正常宫颈、20例CINI、20例CINII、20例CINIII和20例宫颈鳞癌组织中TROP2、Ki67mRNA的表达情况；蛋白质印迹的方法检测例20例正常宫颈、20例CINI、20例CINII、20例CINIII和20例宫颈鳞癌组织中TROP2蛋白的表达情况。结果1、免疫组化法显示：①TROP2蛋白在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变组织中呈阳性表达,主要定位在细胞膜上,且表达水平随着宫颈病变程度的加重而逐渐升高。TROP2在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为22.7%、72.4%、95.4%,三者阳性表达呈逐渐上升的趋势,差异有显著性(χ2=73.124, p=0.000); TROP2在CINI、CINII、CINIII组织中阳性表达率分别为52%、71.4%、86.8%,三者阳性表达呈逐渐上升的趋势,差异有显著性(x2=44.078,p=0.000)；同时研究显示TROP2的表达水平与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级以及淋巴转移有关(p<0.05),而与年龄及肿瘤大小没有明显关联(p>0.05)。②Ki67蛋白在宫颈鳞癌及CIN组织中呈阳性表达,主要定位在细胞核上。Ki67蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为9.1%、62.2%、90.9%,三者阳性表达呈逐渐上升的趋势,差异有显著性(χ2=89.000, p=0.000); TROP2在CINI、CINⅡ、CINⅢ组织中阳性表达率分别为36%、62.8%、78.9%,且表达水平随着宫颈病变程度的加重而逐渐升高,差异有显著性(x2=42.254,p=0.000)；同时研究显示Ki67的表达水平与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级以及淋巴转移有关(p<0.05),而与年龄及肿瘤大小没有明显关联(p>0.05)。③在正常正常宫颈、CINⅠ、 CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中TROP2和Ki67的表达均呈显著正相关(rs=0.583, p=0.004; rs=0.5554, p=0.004; rs=0.430, p=0.01; rs=0.563, p<0.001; rs=0.487, p<0.001)。2、实时荧光定量PCR法显示：①以GAPDH mRNA为内参照标准,正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中TROP2 mRNA的相对表达水平分别为0.97±0.11、1.09±0.17、1.26±0.14、1.51±0.10、1.93±0.17。TROP2 mRNA在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变组织中的表达明显高于其在正常宫颈组织中的表达,与正常组比较CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组差异有统计学意义(p分别为p<0.05、p<0.01、p<0.01),而CINI与正常组比较差异无统计学意义(p<0.05)。②以GAPDH mRNA为内参照标准,正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中Ki67 mRNA的相对表达水平分别为0.93±0.12、1.16±0.08、1.59±0.12、1.94±0.25、2.32±0.14。CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中TROP2、Ki67 mRNA的相对表达水平明显高于正常组,两者比较,差异有统计学意义(p<0.01,p<0.01,p<0.001),而CINI与正常组比较差异无统计学意义(p<0.05)。3、蛋白质印迹法显示：TROP2的灰度随着宫颈组织病变程度的加重逐渐加深,正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中TROP2蛋白的相对表达水平分别为1.0±0.03、1.15±0.12、1.47±0.11、1.79±0.12、2.06±0.11。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌组中TROP2蛋白的相对表达水平明显高于正常组,两者比较,差异有统计学意义(p分别为p<0.01,p<0.001,p<0.001)。结论1、TRoP2的过表达与宫颈鳞癌的发生发展紧密相关,而且TROP2的过量表达与宫颈鳞癌的临床分期,病理分级及淋巴转移紧密相关,而与年龄及肿瘤大小没有明显关联,TRoP2有可能成为宫颈疾病筛查、早期诊断、宫颈鳞癌治疗的重要指标和新靶点。2、Ki67的过表达与宫颈鳞癌发生发展密切相关,且Ki67的过量表达与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级及有无淋巴转移有关,而与年龄及肿瘤大小没有明显关联,Ki67对于进一步了解宫颈鳞癌生物学行为和判断预后有很重要的临床应用价值。3、在正常宫颈、CINI、CINII、CINIII及宫颈鳞癌组织中TROP2和Ki67的表达均呈显著正相关,同时检测ITROP2和Ki67有助于宫颈鳞癌的恶性程度的判断和预测预后。