不同浓度HBsAg负载慢性乙型肝炎病人外周血树突状细胞表型分子的变化

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目的 从慢性乙型肝炎(CHB)外周血单个核细胞(PBMC)体外诱导培养树突状细胞(DCs),研究不同浓度HBsAg负载DCs后表型分子的改变,为DCs治疗CHB可能性提供理论依据。方法 40例CHB病人随机分为四组,每组10例。分离CHB病人PBMC后在体外培养条件下,加入粒单核巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4),诱导DCs增殖分化。三个实验组分别用HBsAg2.5mg/L、5mg/L和10mg/L浓度负载DCs 24小时,对照组不加入HBsAg。计算DCs得率,电镜分析其细胞形态学,流式细胞仪检测各组DCs表型分子的表达情况。结果 1 经本实验体系从CHB PBMC可诱导DCs生成量为1.2-4.7×106/15ml,电镜证实呈典型的DCs细胞形态学;2 对照组DCs表型分子呈极低表达,分别为CD83(8.02±3.99)%、CD80(8.77±2.06)%和MHC-DR(14.05±2.66)%;3经不同浓度HBsAg负载后,DCs表型分子表达上调,结果依次为:HBsAg 2.5mg/L组CD83(18.35±2.93)%、CD80(42.63±7.15)%和MHC-DR(47.49±6.59)%;HBsAg 5mg/L组CD83(17.88±3.12)%、CD80(45.24±10.93)%和MHC-DR(47.07±8.52)%;HBsAg 10mg/L组CD83(16.74±2.86)%、CD80(44.59±6.99)%和MHC-DR(48.59±7.42)%。实验组<WP=4>与对照组比较差异均有显著性(P<0.01),而各实验组间差异无显著性(P>0.05)。结论 1 CHB PBMC经GM-CSF和IL-4混合细胞因子培养体系能诱导一定量DCs产生,表现为典型的树突状细胞形态,但表型分子表达低下,处于非成熟状态;2 不同浓度HBsAg负载非成熟型DCs后,可促使其向成熟型DCs分化,表现为表型分子的表达显著上调,可能使其抗原提呈功能增强,从而激活正免疫应答;3 DCs经高低浓度HBsAg负载后,表型分子表达上调程度大致相似,表明非成熟型DCs抗原摄取能力极强并随之自发分化为成熟型DCs;4 HBsAg负载DCs可能有望成为改善DCs提呈功能的有效途径,逆转CHB特异性免疫耐受,开发免疫治疗新途径。
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