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目的:研究复方银黄微型灌肠剂(YHCE)的体外抗炎效应并探讨其部分分子作用机理,为其临床应用提供实验依据和理论基础。
方法:分离、提取并培养大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ),给予细菌脂多糖(LPS)复制细胞炎症模型,镜下观察细胞形态学的改变。采用MTT比色法检测YHCE对PMΦ的生长活性影响;硝酸还原酶法检测YHCE对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)的影响;免疫细胞化学法分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及分布变化;RT-PCR检测iNOS mRNA表达及变化。大鼠腹腔巨噬细胞经花生四烯酸(AA)、钙离子载体A<,23187>孵育后,采用RP-HPLC检测白三烯B<,4>(LTB<,4>)、5-羟二十碳四烯酸(5-HETE)含量及变化,以反映5-脂氧合酶(5-LOX)活性变化。
结果:1.YHCE对PMΦ的生长有抑制作用,其半数抑制率(IC<,50>)为15.56mg/ml;2.LPS刺激组NO含量、iNOS及iNOS mRNA的表达均显著增加(P<0.01),YHCE给药组及地塞米松干预组对LPS引起的NO含量增加、iNOS及iNOS mRNA表达增加均有明显抑制作用(P<0.01);3.LPS刺激组LTB<,4>、5-HETE较正常对照组含量显著增加(P<0.0 1),YHCE给药组及地塞米松干预组对LPS引起的LTB<,4>、5-HETE含量增加均有明显抑制作用(P<0.01)。
结论:1.LPS能显著增加PMΦNO含量、iNOS及iNOS mRNA表达、LTB<,4>及5-HETE含量,YHCE能抑制LPS引起的PMΦNO含量、iNOS及iNOSmRNA表达、LTB<,4>及5-HETE含量的增加;2.YHCE抑制NO产生、iNOS及iNOS mRNA表达、LTB<,4>及5-HETE合成,即抑制iNOS及5-LOX活性,可能是其抗炎作用分子机理之一。