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研究目的:本课题通过建立老年大鼠骨质疏松模型,观察老年性骨质疏松大鼠血管钙化情况,探讨骨保护素/核因子?B活化因子受体配体(OPG/RANKL)信号通路在老年性骨质疏松和血管钙化中可能的共同作用机制。并通过补肾活血方与Denosumab(DMAB)单独及联合治疗,探讨同步防治老年性骨质疏松和血管钙化之可能性。研究方法:将7月龄雄性SD大鼠随机分为空白对照组(n=16)、假手术组(n=16)和去睾丸组(n=40)。空白对照组,不作处理;假手术组,仅切除睾丸周围部分脂肪组织;其余各组采用双侧睾丸切除术制备大鼠老年性骨质疏松模型。术后第16周,将空白对照组、假手术组和去睾丸组大鼠各处死8只,采用双能X线吸收仪对大鼠右后侧股骨骨密度进行检测,以验证造模是否成功。造模成功后,将去睾丸组随机分为骨质疏松组、补肾活血组、DMAB组和联合治疗组,每组8只。补肾活血组给予补肾活血方55g/kg,灌胃,每日1次,持续给药8周;DMAB组给予DMAB 10mg/kg,皮下注射,每周2次,持续给药4周;联合治疗组给予补肾活血方和DMAB共同治疗,剂量及途径同前;其余各组皮下注射生理盐水10mg/kg,每周2次。干预结束后将所有大鼠处死,采用双能X线吸收仪测量大鼠右后肢股骨骨密度,茜素红染色检测大鼠胸主动脉钙化程度,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测量血清骨形成标志物Ⅰ型前胶原N-端前肽(PⅠNP)、骨钙素(BGP)及骨吸收标志物Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX-Ⅰ)浓度,免疫印迹法(Western-blot)检测大鼠胸主动脉OPG和RANKL蛋白的表达情况。研究结果:1.术后第16周,与空白对照组相比,去睾丸组骨密度显著降低(P<0.01)。术后第24周,骨质疏松组与空白对照组相比骨密度进一步降低(P<0.01),胸主动脉出现明显的钙化沉积,血清PⅠNP和BGP浓度降低(P<0.05),血清CTX-Ⅰ浓度显著升高(P<0.01),OPG蛋白表达显著降低(P<0.01),RANKL蛋白表达显著升高(P<0.01)。假手术组与空白对照组相比,以上指标均无统计学差异。2.与骨质疏松组相比,补肾活血组骨密度明显增高(P<0.05),DMAB组和联合治疗组骨密度进一步增高(P<0.01)。补肾活血组、DMAB组和联合治疗组钙化沉积均明显减少。补肾活血组和DMAB组骨形成标志物血清PⅠNP和BGP浓度升高,且具有统计学意义(P<0.05)。DMAB组骨吸收标志物血清CTX-Ⅰ浓度明显降低(P<0.01)。补肾活血组、DMAB组和联合治疗组OPG蛋白表达明显上升(P<0.01),RANKL蛋白表达明显减少(P<0.01)。3.联合治疗组骨密度与补肾活血组相比差异有显著意义(P<0.01),血管钙化减轻情况优于补肾活血组和DMAB组。联合治疗组OPG蛋白表达增高程度大于补肾活血组和DMAB组(P<0.01),RANKL蛋白表达降低程度大于补肾活血组和DMAB组(P<0.01)。研究结论:1.在造模成功的老年性骨质疏松大鼠胸主动脉可见明显的钙化沉积。2.补肾活血方和DMAB分别单独用药及联合用药均能有效抑制骨吸收、改善骨形成、抑制血管钙化,且联合治疗组在提高骨密度方面优于单用补肾活血方,抑制钙化效果优于单用补肾活血方和DMAB。3.补肾活血方和DMAB单用及联用抗老年性骨质疏松及抑制血管钙化的作用可能是通过OPG/RANKL信号通路介导的。