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鸭疫里默氏菌(RA)是一种可以感染鸭、鹅、火鸡和其它禽类的细菌性病原体。近年来RA对抗生素利福平的耐药情况日益严重。围绕RA耐利福平机制及RA rpoB基因的突变对其生存和适应性的影响,开展的主要研究内容和结果如下:1.鸭疫里默氏菌利福平耐药机制的研究对110株RA进行利福平MIC测定,89%(98/110)RA对利福平具有耐药性,MIC值在0.5256μg/mL之间。对18株RA rpoB序列与MIC关联性进行分析、利用定点突变和自然转化技术构建过表达菌株进行验证,结果表明RA rpoB基因5个氨基酸位点的突变(V382I、H491N、R494K、G502K和S539Y)与利福平耐药相关。试验发现RA-CH-1株和RCAD0147株具有相同的rpoB突变,但对利福平MIC却相差8倍,分别是32μg/mL和256μg/mL。利用外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)和维拉帕米(VP)进行试验,发现RCAD0147编码有与利福平耐药相关的药物外排泵,它与rpoB突变两种机制共同提高RCAD0147对利福平的耐药水平。2.rpoB突变对RA适应性代价的研究利用RA自发突变试验分离到了15种类型的rpoB突变株,其中R494K与分离株中检测到的突变类型完全一致。经菌落平板计数计算得出rpoB基因突变频率约为10-8,所得突变株中98.8%(247/250)位于rpoB基因利福平耐药决定区簇I。除D481Y、I537N和S539F外,其余突变株对利福平MIC至少达到了64μg/mL。位点H491D和484::TAA的突变导致RA出现生长延迟。体外竞争性试验结果显示突变株适应性降低,且位点H491D和484::TAA突变株影响最大(相对适应性分别是0.60和0.63)。最后对R494K和H491D突变株的定殖能力和敏感性进行测定,结果与亲本株相比两突变株对H2O2和SNP的敏感性均上升。体内定殖试验表明,24h内两突变株在感染5日龄雏鸭的气管和脑中定殖的活菌数明显降低。该研究表明RA对利福平耐药的突变株中,rpoB基因单突变导致RA适应性减弱,产生了适应性代价。