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目的1探讨特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)患者中医证候分布规律。2探讨参七虫草胶囊对肺泡上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)过程的影响。3探讨Wnt/β-catenin通路在EMT发生过程中的可能作用。方法1临床观察:查阅相关文献,制定IPF患者中医证候调查表,通过临床问卷调查的方式,搜集76例IPF患者一般情况(包括性别、年龄、病程、吸烟情况、合并疾病等)和中医四诊信息等,通过分析得出IPF患者中医证候分布规律。2动物实验:将128只雄性SD大鼠随机分为四组:空白组(C组)、模型组(M组)、参七虫草组(S组)和泼尼松组(P组),每组32只。适应性饲养7天后,3组大鼠均采用气管内注入博来霉素(bleomycin,BLM)的方法复制肺纤维化模型,空白组气管内注入等量生理盐水。造模后第2天开始灌胃给药,空白组灌入等体积生理盐水。灌胃后第7、14、21和28天取材,苏木精-伊红染色法(Hematoxylin Eosin staining,HE)观察肺组织病理结构,Masson染色法观察肺组织胶原沉积情况,免疫组化(immunohistochemical IHC)法检测肺组织中上皮细胞钙粘素(E-Cadherin,E-Cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达及反转录聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)检测肺组织中Wnt1、Wnt2和β-catenin mRNA表达的动态变化。结果1临床观察:76例IPF患者证候前五:气阴两虚夹瘀(13.16%)、痰热壅肺(10.53%)、痰瘀阻肺(9.21%)、肺肾气虚(7.89%)和肺气阴两虚(7.89%)。2动物实验:2.1 HE染色:空白组大鼠肺泡结构基本清晰完整。模型组大鼠第7天可见肺泡结构紊乱,大量肺泡腔塌陷,肺泡腔内炎性细胞浸润,肺泡间隔开始增宽;第14天见肺泡腔内大量炎性细胞浸润,肺泡间隔继续增宽,成纤维细胞增生,纤维组织形成,胶原沉积;第21天肺泡腔内炎性细胞较第14天减少,肺泡间隔进一步增宽;第28天基本无炎性细胞浸润,以大量成纤维细胞增生、纤维组织形成为主。参七虫草组及泼尼松组大鼠肺组织分别与模型组相应时间点比较,上述病理改变均有不同程度的减轻,参七虫草组与泼尼松组病理变化程度相近。2.2Masson染色:空白组大鼠肺泡间隔有少量蓝染胶原纤维分布。模型组大鼠肺组织第7天可见染成蓝色的胶原纤维沉积,主要集中于终末支气管壁、血管壁及肺泡间隔;第14天各部位蓝色染区颜色加深,胶原纤维进一步沉积;第21和28天,蓝色染区进一步增多,颜色进一步加深,表明大量胶原沉积,弥漫性纤维组织形成。参七虫草组及泼尼松组大鼠肺组织分别与模型组相应时间点比较,各组肺泡间隔宽度较模型组减小,蓝染胶原沉积量减少,纤维化程度减轻。参七虫草组与泼尼松组胶原沉积程度相近。2.3E-cad、α-SMA和Vimentin蛋白:第7、14、21和28天,E-cad蛋白表达模型组低于空白组,α-SMA和Vimentin蛋白表达模型组高于空白组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),参七虫草组和泼尼松组E-cad蛋白表达高于模型组,α-SMA和Vimentin蛋白表达低于模型组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),参七虫草组和泼尼松组E-cad和Vimentin蛋白表达相近,组间比较差异无统计学意义(P(29)0.05),第28天,参七虫草组α-SMA蛋白表达低于泼尼松组,差异有统计学意义(P(27)0.05);空白组4个时间点肺组织中E-cad、α-SMA和Vimentin蛋白表达无明显差异(P(29)0.05),模型组、参七虫草组和泼尼松组第14、21和28天肺组织中E-cad蛋白表达逐渐降低,α-SMA和Vimentin蛋白表达逐渐升高,组内比较差异有统计学意义(P<0.05)。2.4 Wnt1、Wnt2和β-catenin mRNA:第7、14、21和28天,Wnt1、Wnt2和β-catenin mRNA表达模型组高于空白组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),参七虫草组和泼尼松组Wnt1、Wnt2和β-catenin mRNA表达低于模型组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),参七虫草组和泼尼松组组间比较,差异无统计学意义(P(29)0.05);空白组4个时间点肺组织中Wnt1、Wnt2和β-catenin mRNA的表达无明显差异(P(29)0.05),模型组第14和21天,肺组织中Wnt1、Wnt2和β-catenin mRNA表达逐渐增加,第21天最高,第28天有所下降,组内比较差异有统计学意义(P(27)0.05)。参七虫草组和泼尼松组第14和21天,肺组织中Wnt1和Wnt2 mRNA表达逐渐增加,第21天最高,第28天有所下降,组内比较差异有统计学意义(P(27)0.05),而β-catenin mRNA表达组内比较差异无统计学意义(P(29)0.05)。结论1气阴两虚夹瘀型为IPF患者常见证候类型。2参七虫草胶囊能够抑制肺纤维化大鼠肺组织的炎症及胶原沉积,抑制E-cad蛋白表达的降低,抑制α-SMA和Vimentin蛋白表达的升高,从而抑制EMT过程的发生,一定程度上抑制肺纤维化。3参七虫草胶囊能够抑制肺纤维化大鼠肺组织中Wnt1、Wnt2和β-catenin mRNA的表达升高,推测其抑制肺纤维化可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。