论文部分内容阅读
鸡腿菇是一种营养价值很高的可栽培食用菌,具有降血糖、降血脂、抗肿瘤以及抗氧化等优良特性。但其子实体在采摘后会出现自溶现象,严重影响了鸡腿菇的商业价值。本研究基于高通量测序技术首次对不同时期的鸡腿菇子实体进行转录组测序,挖掘与子实体自溶现象相关的基因,以期从基因水平上实现对鸡腿菇子实体自溶现象的抑制,为鸡腿菇栽培产业的健康发展提供理论依据。本研究得到主要结论如下:1.鸡腿菇子实体微观形态特征的观察。培养第27天,鸡腿菇子实体个体不再继续增大,菌褶白色,担子上出现担子梗,担孢子呈透明状,各组织的菌丝体细胞壁完整,即为成菇期(M);培养第30天,鸡腿菇子实体菌褶边缘颜色开始变为粉色,部分担孢子呈现黑色,各组织菌丝细胞壁形态仍然完整,即为变色期(D)。由此我们推测,菌褶颜色变化的变色期是自溶过程中的关键时期。2.转录组测序。提取鸡腿菇M期和D期的子实体的总RNA,进行转录组测序,经过序列质控过滤后得到29,281条转录本,12,941条uingenes,总长度为49,031,913 bp,最长的转录本长度为16,420 bp,最短的转录本长度为201 bp,组装得到的所有转录本平均长度为1,674.53 bp,N50值为2,606 bp,GC含量为44.1%。M期中有10,178条unigene表达,D期中有9,722条unigene表达,两个时期间相关性系数均大于0.85,表明转录组测序数据较好,两个时期重复性高,可用于后续分析。3.自溶相关基因的挖掘。对M期和D期之间的差异表达基因进行分析,共发现4,516条差异表达基因,其中在D期上调表达的有2,201条,下调表达的有2,315条。对这些差异表达基因进行功能注释及富集分析,得到核糖体通路、DNA复制通路以及细胞周期通路可能与自溶现象有关。此外,还得到葡聚糖酶、几丁质酶、色素合成相关酶、自噬与程序性死亡相关基因、F-box和HMG结构域、转录因子Rlm1基因可能与自溶现象有关。4.部分自溶相关基因的验证。从核糖体通路、细胞周期通路、DNA复制通路及与自溶有关的葡聚糖酶、几丁质酶、色素合成相关酶、自噬与程序性死亡相关基因、F-box结构域、HMG结构域以及转录因子Rlm1中,随机选取20个基因进行验证,有12个基因的数据与转录组数据相符。