敌草隆免疫胶体金快速检测试纸条的开发

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:zhairui15
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本论文优化建立了敌草隆胶体金免疫层析试纸条的快速检测技术,并有效用于水样中敌草隆的快速筛选。敌草隆抗血清经过protein A-sepharose4B以及KLH-sepharose4B亲和层析纯化,得到敌草隆的多克隆抗体,采用柠檬酸三钠还原法和硼氢化钠还原法分别制备不同粒径的胶体金,经透射电镜鉴定粒径分别为17nm和6.56nm,且均匀。将不同粒径的胶体金分别标记多克隆抗体,将敌草隆包被抗原BSA-6C和羊抗兔二抗分别包被在硝酸纤维素膜上作为检测线和控制线,优化建立了间接竞争检测方法,即利用敌草隆与固相载体膜上的敌草隆-牛血清白蛋白(Diuron-BSA)偶联物(即包被抗原)竞争结合金标记抗体,通过目视可快速定性判断样品中敌草隆残留水平。优化后的条件为:抗原包被量为0.24μg,金标抗体的稀释倍数为1:2,羊抗兔二抗以1:500稀释。敌草隆试纸条的方法检出限为5ng/mL,选取15种阴性水样作为检测样品,分别添加5、20、100ng/mL的敌草隆标准品,经0.22μm微孔滤膜过滤后直接上样检测,经试纸条和HPLC检测,结果一致性较好,验证了方法的准确性。课题进一步选择灭草隆、绿谷隆、氯溴隆、利谷隆、塞苯隆五种敌草隆的结构类似物,考察了它们对敌草隆试纸条检测的干扰。在浓度为1000μg/L时,五种结构类似物对敌草隆检测均无明显干扰,说明了敌草隆胶体金免疫层析试纸条的高特异性。论文所开发的胶体金试纸条无需检测仪器,操作简单,快速,10min内即可得出检测结果。实验结果稳定性高,可作为水样中敌草隆残留现场大量筛选的有效手段。
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