诱导型启动子pGⅢ调控元件及转基因水稻研究

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本文从大麦中克隆了GⅢ基因启动子pGⅢ,与gus报告基因构建了植物表达载体,以水稻为转化受体,通过gus报告基因表达量的分析,对该启动子的诱导活性进行测定并对其调控元件进行了初步研究.根据已发表的序列,本文从大麦(Hordeum vulgare L. cv.Clipper)中克隆了GⅢ基因启动子pGⅢ(1310 bp),并与gus报告基因构建了植物表达载体pGⅢ-GUS.农杆菌介导转化水稻(Oryza sativa L. cv.Taipei 309),获得了转基因水稻15株.通过5′缺失法分别获得了约1.1kb、712bp、572 bp、 359 bp、116 bp的pGⅢ缺失体片段(pG1~pG5),并分别与gus报告基因构建了植物表达载体.农杆菌介导转化水稻,对其在水稻愈伤组织中的诱导活性进行了研究.GUS组织化学染色结果表明,SA和激发子处理的各转化愈伤均有GUS蓝色;细胞观察结果表明gus基因在愈伤细胞中获得了表达.GUS定量分析结果表明,SA诱导后pG1~pG4驱动的gus基因表达均表现出了较高的诱导活性,比对照升高了16~32倍.激发子诱导后,pG1~pG3驱动的gus基因表达均表现出了较高的诱导活性,比对照升高了19~47倍;pG1的诱导活性均为最高.pG3缺失体片段包含了上述保持激发子与SA诱导活性所必需的序列,为了进一步检测pG3在水稻植株中的诱导活性,本文对该启动子的转基因水稻进行了研究.通过PCR检测,证实获得了11株含pG3/gus嵌合基因的转基因水稻.以上结果表明pGⅢ为一种强诱导型启动子,并可能是一种病原菌诱导型的启动子.一般外源抗性基因在转基因植物中的表达策略多为组成型表达.pGⅢ病菌诱导型启动子的研究将为水稻及其他单子叶植物提供更多的启动子选择,尤其将为抗病基因工程植物的获得打下良好的基础.
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