烟草黑胫病(Phytophthora parasitica var. nicotianae)是烤烟生产上主要的病害之一,我国平均每年的烟草黑胫病发病面积达76373hm2,产量损失2.86926×107kg,造成的损失达一亿元以上。对于该病的防治,目前主要采用化学农药防治,随着化学农药引起的环境污染以及人们公认的3R(抗性、残毒、再猖獗)问题的出现,利用自然环境中的拮抗微生物防治植物病害愈来愈受到人们的重视。放线菌是拮抗微生物的重要来源,在植物病害的生物防治中占有重要地位。本试验从采自山东几大烟区的烟草根围土壤中分离筛选出对烟草黑胫病菌有拮抗效果的放线菌,进行温室控病研究及菌株的鉴定,并进一步对发酵条件、发酵产物的稳定性及促生作用进行了研究。试验结果如下:1.采用稀释平板法从土壤中分离到125株放线菌。采用平板对峙法和菌丝生长速率法相结合对其进行初步筛选和再次筛选,经初步平板筛选后,获得了对烟草黑胫病菌拮抗活性较强的8株放线菌菌株。经发酵液再次筛选发现在这8株菌株中菌株97对烟草黑胫病菌的抑菌效果最好,抑制率达58%。菌株97菌体及其产生的拮抗物质除对烟草黑胫病菌有较强的抑制作用外,还对供试的其他13种病原真菌都有一定的抑制作用,尤其对苹果轮纹病菌,菌丝生长抑制率达68%。2.对菌株97的形态和培养特征观察、生理生化特性分析、细胞壁组分测定及16S rRNA序列分析结果表明:该菌内菌丝无横隔、不断裂,气生菌丝多分枝。孢子丝长直或弯曲,孢子短杆状,表面光滑。细胞壁化学组分I型,糖型C型,表明该菌株属于链霉菌属(Streptomyces);同时,在以16S rRNA序列为基础构建的系统发育树中,菌株97与淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)的同源性最高,为98.48%。初步鉴定,菌株97为淡紫灰链霉菌(S. lavendulae)。3.为了提高活性物质产量,对菌株97的培养基进行了筛选并对其发酵工艺条件进行了初探。得到培养基最佳配方为:小米10.0 g,葡萄糖10.0 g,碳酸钙2.0 g,氯化钠2.5 g,蛋白胨3.0 g。最佳发酵工艺条件为:种子液菌龄36h,接种量6%,发酵时间120h,培养基初始pH7.0,装液量为50mL/250mL三角瓶,发酵温度28℃,摇床转速180r/min。4.对菌株97发酵液的稳定性测定结果表明:发酵液在4℃条件下储藏稳定性更好,在偏酸性或中性条件下稳定,有较强的热稳定性和抗紫外线照射能力,对蛋白酶K稳定性较好。5.通过温室盆栽试验和皿内沙培试验,考察了菌株97五种不同浓度的发酵液对烟草黑胫病的防治效果及对烟草幼苗的促生作用。结果表明:10倍稀释液的预防效果最好且最稳定达到了70.9%,并且10倍稀释液对烟草种子的发芽率、苗高、苗重、根长及根重都产生了一定的影响,能够很好的促进烟苗的生长。