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电化学生物传感器因其高灵敏度、结构简单、造价低廉、操作方便及易微型化等特点而被广泛接受。目前已在生物医学、环境监测、食品及医药等众多领域获得应用。电化学生物传感器是最常用的生物传感器之一,它是基于生物反应过程中,生成或消耗了电化学物质如电子以产生能被检测到的电化学信号这一原理而制得的。生物活性物质的固定化技术是生物传感器得以开发和改进的重要技术背景。固定化的目的在于使酶等生物活性物质在保持固有性能的情况下处于不易散失的状态,以便同基础电极组装在一起。在电极上生物分子的固定方法有多种,通常有载体结合法(吸附法、交联法)、共价键合法、凝胶/聚合物包埋等方法,在许多情况下,这些方法还可联合使用。本文基于生物分子固定化技术的新发展,结合介体分子能加速电子传递的特殊性能,提出了植物生长激素与过氧化氢两类传感器的制备方法,具体内容包括如下: 1.提出了一种以绿豆芽叶片组织—二茂铁修饰的碳糊电极作为植物生长激素β-吲哚乙酸传感器的研制方法,探讨了影响电极性能的因素,初步研究了IAA氧化酶处于最优活性的基本条件。该传感器以包埋在碳糊内的二茂铁作为电子传递媒介,在绿豆芽叶片组织所含酶的催化下,能较好的氧化IAA。所测得氧化峰电流变化值与β-吲哚乙酸浓度在8μg/mL--160μg/mL范围内呈良好的线性关系。传感器制作简单,使用方便,能用于IAA试样的快速测定,在样品回收率的实验中取得满意结果。 2.提出了一种酶标识抗原与待测样品的竞争免疫反应定量测定IAA的方法。方法基于金基底上形成的均一、稳定、有序的巯基乙酸自组装单层膜,在EDC、NHS活化下,能以共价方式固定抗体。待测样品IAA含量的对数值,与酶标催化介体邻氨基酚的氧化电流的大小成反比,利用这一关系可得校正曲线。循环伏安法探讨了底物在不同条件下的反应特征,并研究了最佳实验条件。对样品IAA的总含量进行测定,结果令人满意。 3.构造了一种以2,6-吡啶二甲酸电聚合膜为基底,以共价键合的半胱胺固定的钠米金胶吸附辣根过氧化物酶的过氧化氢生物传感器。在对苯二酚作介体条件下,实现电流的多级放大。该传感器与2,6-吡啶二甲酸聚合膜-辣根过氧化物酶修饰的传感器比较,具有更高的稳定性,更低的检测下限。在工作电位-100mV 条件下,能快速催化还原过氧化氢。在传感器制作中,酶固定方法简单易行, 制得的电极可多次重复使用,具有较好的使用价值。4.提出了一种新的过氧化氢电化学传感器的制备方法。利用循环伏安法,在金电 极表面电化学沉积一层铁氰酸镍膜(NIHCF),在一定电位条件下,它能快速 催化还原过氧化氢,其响应电流与过氧化氢的浓度呈线性关系。经Nafion修 饰后的铁氰酸镍膜性能稳定,能排除多种物质对过氧化氢的干扰。用循环伏安 法探讨了 Ni、C。和 Cll 的三种铁氰酸盐修饰电极的性能及电化学特性,并研 究了各种实验条件对过氧化氢传感器性能的影响。比较表明,铁氰酸镍膜修饰 的传感器性能最佳。该传感器制作简单,使用寿命长,在实际试样的回收率测 定中,结果满意。