论文部分内容阅读
目的:研究回生口服液是否通过调控程序性死亡受体1(Programmed death-1,PD-1)/程序性死亡配体-1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)信号通路,抑制L ewis肺癌小鼠肺癌细胞免疫逃逸,恢复机体抗肿瘤免疫功能,促进肺癌康复;研究结果可为制定肺癌临床治疗与康复新方案提供实验依据。方法:1.70只健康C57BL/6J小鼠采用随机数字表随机分为空白对照组、模型组、顺铂组、回生口服液组、回生口服液+顺铂联合用药组。空白对照组正常饲养,其余四组建立Lewis肺癌模型。2.造模成功后,空白对照组、模型组每日给予生理盐水灌胃;回生口服液组每日给予回生口服液灌胃;顺铂组每日给予生理盐水灌胃,每周2次予顺铂注射液腹腔注射;联合用药组每日给予回生口服液灌胃,每周2次予顺铂注射液腹腔注射。共干预2周。3.治疗过程中观察记录各组小鼠一般情况,测量小鼠瘤体体积;干预结束后,剥取瘤组织,计算抑瘤率,透射电镜观察肺癌细胞超微结构;应用Westernblot法检测肺癌组织PD-L1、PD-1蛋白表达;流式细胞技术检测外周血CD4+T、CD8+T、CD4+CD25+CD127low/-Tregs占淋巴细胞比例。结果:1. 一般情况模型组肺癌小鼠在治疗过程中逐渐出现精神萎靡,反应迟钝,进食饮水减少,活动能力下降,喜扎堆生活,皮毛光泽度下降等现象;各组小鼠一般情况由好到差的程度对比为:空白对照组>回生口服液组>联合用药组>模型组>顺铂组,提示回生口服液有改善肺癌小鼠一般情况的作用。2. 各组药物治疗肺癌有效性检验(1)瘤体生长速度:经瘤块体积变化反应瘤体生长速度,从快到慢依次为模型组>回生口服液组>顺铂组>联合用药组。(2)瘤重及抑瘤率:与模型组比较,回生口服液组、顺铂组、联合用药组瘤重明显减轻(P<0.05);抑瘤率有统计学意义(P<0.05),联合用药组抑瘤率高于顺铂组及回生口服液组(P<0.05)。(3)透射电镜观察:模型组肺癌细胞核大、不规则,有假包体形成,但细胞器相对完整,线粒体无明显肿胀,未见明显凋亡。回生口服液组、顺铂组、联合用药组同样可见肺癌细胞核大、不规则,有假包体形成,但出现线粒体肿胀,细胞中可见自噬体及凋亡小体,并见许多细胞进入凋亡状态,联合用药组最为明显。3. 各组药物对肺癌细胞免疫逃逸关键靶点PD-1、PD-L1蛋白表达的影响(1)PD-L1蛋白:与模型组比较,回生口服液组及联合用药组PD-L1蛋白表达均下调(P<0.05),顺铂组PD-L1蛋白表达上调(P<0.05);回生口服液组PD-L1蛋白表达低于联合用药组(P<0.05)。(2)PD-1蛋白:与模型组比较,回生口服液组及联合用药组PD-1蛋白表达均下调(P<0.05);顺铂组PD-1蛋白表达与模型组无统计学差异;与顺铂组比较,回生口服液组及联合用药组PD-1蛋白表达均下调(P<0.05);回生口服液组PD-1蛋白表达低于联合用药组(P<0.05)。4. 各组药物对外周血CD4+T、CD8+T、CD4+CD25+CD127low/-Tregs比例的影响(1)CD4+T:与空白对照组比较,模型组、顺铂组及联合用药组CD4+T比例均下降(P<0.05),回生口服液组与空白对照组无统计学差异;与模型组比较,顺铂组CD4+T比例无统计学差异,回生口服液组及联合用药组CD4+T比例升高(P<0.05),且回生口服液组CD4+T比例高于联合用药组(P<0.05)。(2)CD8+T:与空白对照组比较,模型组、顺铂组CD8+T比例均下降(P<0.05),联合用药组CD8+T比例升高(P<0.05),回生口服液组CD8+T比例无统计学差异;与模型组比较,回生口服液及联合用药组CD8+T比例均升高(P<0.05),且联合用药组升高比例最大,顺铂组CD8+T比例无统计学差异。(3)CD4+CD25+CD127low/-Tregs:与空白对照组比较,模型组、顺铂组、联合用药组Tregs比例均升高(P<0.05),回生口服液组与空白对照组无统计学差异;与模型组比较,回生口服液组及联合用药组Tregs比例均下降(P<0.05),顺铂组Tregs比例差异无统计学意义;联合用药组与回生口服液组无统计学差异。结论:1.回生口服液可抑制Lewis肺癌小鼠肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,改善Lewis肺癌小鼠一般生存情况;回生口服液与顺铂联合用药,可对顺铂治疗肺癌起增效减毒作用。2.回生口服液可能通过抑制PD-1及PD-L1蛋白表达,阻止PD-1/PD-L1信号通路激活,一方面提升CD4+T、CD8+T水平,恢复CD8+T对肺癌细胞识别及杀灭能力;另一方面下调CD4+CD25+CD127low/-Tregs水平,改善肺癌免疫抑制微环境,阻止肺癌细胞逃避免疫系统识别与杀伤,发挥调控肺癌细胞免疫逃逸的功效,达到治疗肺癌、促进肺癌康复的作用。