基于电化学传感器方法对荸荠乙醇提取物抑菌作用研究

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荸荠这一药食两用的浅水生草本植物,其食用历史在我国由来已久,同时中国也是全世界种植、消费和出口荸荠的第一大国。荸荠既能作为果蔬直接食用,又能入药,同时其特有的抑菌活性物质又能被制成抑菌剂或食品防腐剂。我国辽阔的疆域和多变的气候条件导致不同地区不同品种的荸荠品质差异较大。本论文目的是通过比较不同品种的荸荠营养指标以及从不同品种荸荠果皮和果肉中提取的抑菌活性物质抑菌能力的强弱,优选出最优的组份。通过电化学细菌传感器高效验证提取物的抑菌能力,并对目标菌活性作实时监控,最后通过响应面分析法得出最佳的目标荸荠抑菌物质提取工艺,以期为荸荠品种的选择、菌数的快速检测和提取工艺优化提供理论依据。首先以桂林荸荠、水马蹄、孝感荠、苏荠、光洪荸荠、余杭荠这六个品种的荸荠为研究对象,通过比较其基础营养指标和果皮、果肉中提取的抑菌物质的抑菌能力强弱,优选出苏荠果皮这单一组份在具有价高营养价值的同时,其提取物的抑菌活性最强。该提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径分别为9.8mm和10.1mm;抑菌持久性约为14d;对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌最小抑菌浓度分别为0.625μg/ml、1.25μg/ml和 1.25μg/ml。在选定苏荠皮这一单一研究对象后,通过大肠杆菌抗体和金纳米粒子修饰裸金电极,另被修饰后的电极可以特异性的捕捉本实验所用的三种指示菌的活性情况,再用不同浓度的荸荠抑菌物质提取液干预指示菌液,通过检测活菌数直观反应荸荠提取物对于这三种菌的综合抑菌能力,建立阻抗值与活菌数的线性关系。该方法可以在3h内完成菌液浓度检测,且检测限达到8CFU mL-1,同时实验结果还表明随着苏荠皮提取物的浓度增加,相对菌活力逐渐减小,并于25%左右处趋于稳定,当提取物浓度大于2.50μg/ml时,对0157:H7型大肠杆菌表现出较强的抑菌活性。最后再通过响应面分析法,选定料液比、提取剂、提取温度和提取时间为变量,以抑菌物质的提取率和相对菌活力为响应值,优化的提取工艺,实验结果表明:以60%的乙醇为提取剂,当超声波频率为40KHz,料液比为1:19,提取温度为56℃,提取时间为35min的条件下,苏荠皮抑菌提取物提取率可以达到33.2%,同时相对菌活力为28.9%,抑菌效果良好。
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